Singolo Drosophila Ommatidium Dissection e Imaging

Summary

Il fattore limitante l'uso degli adulti<em> Drosophila</emOcchio> per studiare neurodegenerazione e biologia cellulare è l'imaging difficile dei processi intracellulari. Descriviamo la dissezione dei singoli ommatidi per generare una buona fede colture primarie di cellule neuronali, che possono essere soggetti a trattamento farmacologico e di imaging avanzate.

Abstract

La mosca della frutta Drosophila melanogaster ha dato un contributo inestimabile alla ricerca neuroscientifica ed è stato ampiamente utilizzato come modello per le malattie neurodegenerative a causa della sua potente genetica ^1. L'occhio vola in particolare è stato l'organo di scelta per la ricerca neurodegenerazione, essendo la parte più accessibile e di vita indispensabili del sistema nervoso Drosophila. Ma l'avvertimento principale degli occhi intatto è la difficoltà, a causa della intensa autofluorescenza del pigmento, in eventi di imaging intracellulari, come autofagia dinamica ^2, che sono di primaria importanza per la comprensione della neurodegenerazione.

Recentemente abbiamo usato la dissezione e la cultura dei singoli ommatidi ³ che è stato essenziale per la comprensione delle disfunzioni autofagici in un modello di volo Dentatorubro-Pallidoluysian Atrofia (DRPLA) ^{3, 4.}

Ora segnalare una descrizione completa di questa tecnica (Fig. 1), adattato da studi elettrofisiologici ^5, che rischia di ampliare notevolmente la possibilità di modelli di volo per neurodegenerazione. Questo metodo può essere adattato a vivere immagine eventi subcellulare e per monitorare la somministrazione efficace farmaco su cellule fotorecettrici (Fig. 2). Se usato in combinazione con tecniche di mosaico ^6-8, le risposte di cellule geneticamente diverse possono essere analizzati in parallelo (Fig. 2).

Protocol

1. Dissezione della retina Drosophila Riempire un pozzo di un 3-Bene vetrino con tampone fosfato (PBS 1X), e poi anestetizzare vola da CO 2. Sia i maschi che le femmine possono essere utilizzati per questo esperimento. Una volta che le mosche sono anestetizzati, prendere una mosca con pinze e inseritelo nel piccolo piatto di PBS. In un ambito di dissezione, pizzicare la proboscide con una pinza, e poi staccare la testa dal corpo eliminando il collo con una seconda serie…

Discussion

La dissezione ommatidium singolo presentato qui permette la raccolta di informazioni delle cellule più profonde sui processi biologici come la neurodegenerazione, quando modellato negli occhi Drosophila. I neuroni dei fotorecettori sono più facilmente accessibili di altri neuroni e citoplasma è particolarmente grande, e quindi adatto per studiare la dinamica delle vescicole, nelle cellule stesse utilizzate proficuamente in molti modelli di quantificare neurodegenerazione in vivo. L'aspetto criti…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments (optional)
Portable CO2 Dispenser	Flystuff	59-150	Refills also available
DUMONT Tweezer No 5	AGAR Scientific	T5034
3-Well Glass Slide	EMS	71561-01
Micro scissors	VWR	HAMMHSB516-09
Schneider’s Medium	VWR	733-1663
LysoTracker Red DND-99	Invitrogen	L7528
Superfrost Slides	VWR	631-0108
Vectashield with Dapi	Vector Labs	H-1200
Coverslips	VWR	631-1336