白色念珠菌生物膜芯片（CA BChip）为高通量的抗真菌药物筛选
Summary
我们已经开发出一种高密度芯片平台的3D纳米生物膜的组成<em> C。白念珠菌</em>称为<em>钙</em> BChip。上测试药物的敏感性个人资料<em>钙</em> BChip是传统的96孔板模式相媲美，表明真菌的芯片非常适合真正的高通量筛选抗真菌药物。
Abstract
白念珠菌仍然是主要病原念珠菌，目前第四个最常见的在美国的医院院内血流感染。这些机会性感染造成损害个人越来越多越来越大的威胁，并进行不可接受的高死亡率。这是由于抗真菌药物的有限阿森纳的一部分，但也出现抵抗最常用的抗真菌药物。进一步复杂化的治疗方法是，多数表现念珠菌生物膜的形成与相关的事实，并在这些生物膜的细胞显示临床使用抗真菌药耐药水平的提高。在这里，我们描述的C.组成的高密度芯片的发展白念珠菌生物膜纳米，我们有一个名为钙 BChip 3。简言之，一个机器人微阵列用tØ打印C.酵母细胞到固体表面的白色念珠菌 。在印刷过程中，酵母细胞被包围在一个三维矩阵使用量低至50 NL，并固定在一个合适的涂层的玻璃基板。经过最初的印刷，幻灯片培养24小时，使生物膜的发展，在37°C。在此期间的景点成长为全面发展的“纳米生物膜”，显示典型的结构和表型特征与成熟的三白念珠菌生物膜（ 即形态的复杂性，三维结构和耐药性）4。总体而言， 钙 BChip是〜750相当于和空间不同生物膜的组成与打印多个芯片可以同时处理额外的好处。估计FUN1代谢的荧光强度染色用芯片扫描仪通过测量细胞活力。这种真菌芯片非常适合为u在真正的高通量筛选抗真菌药物的发现本身。与现行标准（ 即 96酶标板模型生物膜形成5）相比，真菌生物膜芯片的主要优点是自动化，小型化，节省试剂和分析时间的量和成本，以及消除劳动密集的步骤。我们相信，这种芯片将显着加快的抗真菌的药物发现过程。
Protocol
Discussion
我们已经开发了一个基于细胞的高密度芯片，CA BChip， 白念珠菌生物膜的纳升量组成。芯片上印改性玻璃基板，允许强大的胶原蛋白凝胶点附件，同时提供必要非蔓延，半球形的三维凝胶疏水。一个单一的钙 BChip可以取代约八96孔板，和几个芯片可以打印，并在同一时间处理。该芯片采用纳米级的文化，可以方便，快捷的处理，适合自动化，最大限度地减少手工劳动和成本，?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作的部分资金由来自南得克萨斯科技管理（POCrr 2009.041），整合从国家研究资源中心（UL 1RR025767）医学和科学学院的赠款和牙科及颅面研究国家研究所（ 5R21DE017294）。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| 3-aminopropyltriethoxysilane (APTES) | Sigma-Aldrich | 440140 |
| Polystyrene-Co-Maleic Anhydride (PS-MA) | Sigma-Aldrich | 426946 |
| Glass microscopy slides | Fisher Scientific | 12-549-3 |
| Rat Tail collagen type I | BD Biosciences | 354236 |
| Robotic Microarrayer | Omnigrid Micro | MICROSYS4000/4100A |
| Microarray Scanner | Genepix Personal 4100A | GENEPIX4100A |
| Hybridization Cassette | ArrayIt Corporation | AHCXD |
| FUN1 [2-chloro-4-(2,3-dihydro-3-methyl-(benzo-1,3-thiazol-2-yl)-methylidene)-1-phenylquinoliniumiodide] | Invitrogen Corp. | F-7030 |
| Fluconazole | Sicor Pharmaceuticals, Inc. | J02AC01 |
| Amphotericin B | Sigma | A2411 |
| RPMI-1640 | Mediatech, Inc. | 50-020-PC |
| Ceramic Tip 190 μm orifice | Digilab | 60020441-00 |
| GraphPad Prism Software | GraphPad Software, Inc. | |
| Genepix Pro V4.1 | Molecular Devices |
Referências
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