Summary
इस कागज विवरण कैसे सतत प्रवाह hypoxia के कक्षों का उपयोग करने के लिए ओ परिभाषित सांद्रता के साथ वातावरण उत्पन्न
Protocol
1. पर्यावरण मंडलों का निर्माण
- छोटी कक्ष की उचित मात्रा अपनी परियोजना के दायरे के लिए आवश्यक का चयन करें. चैंबर गैस का बनाया जाना चाहिए (2 हे) अभेद्य सामग्री. Pyrex crystallization के बर्तन, Anaeropack बक्से, या बड़े कलाकारों ऐक्रेलिक बक्से (एलार्ड एएमयू), इस्तेमाल किया जा सकता है. हमने पाया है कि एक 100 x 50 KIMEX क्रिस्टलीकरण पकवान 9 50 मिमी प्लेट में फिट कर सकते हैं. ग्लास प्लेट Pyrex crystallization के बर्तन के लिए lids के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है.
- चयनित कक्ष में एक छेद ड्रिल और एक प्लास्टिक की नली आँकड़ी फिटिंग (कोल परमार) Luer पुरुष के साथ फिट. फिटिंग पाइप फिटिंग द्वारा या epoxy के साथ प्राप्त किया जा सकता है. कंटेनर के लिए अनुमति देने के लिए में गैस प्रवाह और कक्ष के बाहर के विपरीत पक्ष पर एक समान फिटिंग स्थापित करें. यदि संभव हो तो, छेद अशांत मिश्रण वृद्धि ऑफसेट.
- परिभाषित हे 2 (2 एन के साथ संतुलित) सांद्रता है कि ओ 2 सह के लिए मानक प्रमाणित कर रहे हैं के साथ संकुचित गैस टैंक प्राप्तntent या anoxic शर्तों के लिए, शुद्ध 2 एन (<10 पीपीएम 2 हे). लंबी अवधि के अध्ययन के लिए स्वत: स्विच पर नियामकों का उपयोग करने के लिए कक्षों में ऑक्सीजन के स्तर में खलल न डालें से बचने के लिए.
- Hypoxia के लिए organismal प्रतिक्रिया के लिए तापमान निर्भर 15 होना दिखाया गया है. एक मशीन में कक्ष रखने के द्वारा, अलग तापमान बनाए रखा जा सकता है. एक मशीन के भीतर तापमान असमान और इस तरह के रूप में हो सकता है, यह समझदारी है तापमान डेटा लकड़हारा का उपयोग करने के लिए लगातार कक्ष के अंदर के तापमान को मापने.
2. पर्यावरण चैंबर के गैस कनेक्ट
- सभी कनेक्शनों के लिए, एक 8 इंच बाहरी व्यास या तो तस्वीर connectors या संपीड़न फिटिंग से जुड़े टयूबिंग का उपयोग करें. अभेद्य और unreactive टयूबिंग 2 हे, fluorinated के ethylene propylene के रूप में (FEP) या नायलॉन (कोल परमार) के साथ होना चाहिए. पूरा सेटअप के एक योजनाबद्ध के लिए, चित्र 1 देखें.
- कॉम कनेक्टदबाया गैस प्रवाह नियंत्रण डिवाइस के लिए एक जन प्रवाह नियंत्रक (सिएरा उपकरण) या rotameter (अलबोर्ग), टैंक के रूप में. सुनिश्चित करें कि टैंक से नदी के ऊपर दबाव प्रवाह डिवाइस और आँकड़ी फिटिंग नली की सीमा के भीतर है. दो चरण नियामकों आम तौर पर दूसरा वांछित दबाव करने के लिए सेट चरण के साथ उपयोग किया जाता है, [उचित प्रवाह की दर का चयन करने के लिए तीन अनुभाग देखें]
- आसुत जल के माध्यम से हाइड्रेट बुदबुदाती द्वारा गैस fritted सिलेंडर के साथ एक गैस धोने बोतल का उपयोग करते हुए, तो पर्यावरण कक्ष पर फिटिंग की, दूसरी फिटिंग गैस निकास के लिए खुला छोड़ (चित्रा 1 देखें) में प्रत्यक्ष. अल्पकालिक अध्ययन के लिए, गैस जलयोजन थाली dessication के खिलाफ की रक्षा, लेकिन नमी निगरानी लंबे समय तक अध्ययन के लिए आवश्यक हो सकता है.
- डॉव Corning वैक्यूम तेल कक्ष सील करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. चैम्बर के ढक्कन पर जगह वजन एक airtight सील सुनिश्चित करने के लिए. एक तंग सील और पर्याप्त प्रवाह की पुष्टि करने के लिए y के हथेली में पानी की एक छोटी पूल पकड़हमारे कक्ष पर बाहर फिटिंग के लिए दस्ताने हाथ और बुलबुले लिए जांच.
3. प्रवाह की दर का चयन
- मिश्रण एकदम सही मान लिया जाये कि, 90% गैसीय वातावरण गैस विनिमय प्रत्येक बार कक्ष की मात्रा (है Fick कानून) प्रतिस्थापित किया गया है है. उदाहरण के लिए, 100 सीसी / मिनट की एक प्रवाह की दर के साथ एक 100 सीसी कक्ष में, मूल घर हवा कक्ष में 1 मिनट के बाद अपने वांछित गैस के 90% के साथ प्रतिस्थापित किया जाएगा, और 90% हर मिनट द्वारा asymptotically पूरा मुद्रा दृष्टिकोण उसके बाद.
- उच्च प्रवाह दरों और छोटे कंटेनरों अपने वांछित ऑक्सीजन एकाग्रता और अधिक जल्दी से पहुंच जाएगा. 100 के लिए x 50 KIMEX (400 सीसी), कंटेनर, 120 सीसी / मिनट के प्रवाह की दर में 10 मिनट (3 एक्सचेंजों) में 99.9% विनिमय पहुंच जाएगा. यह प्रवाह दर अधिकांश ऑक्सीजन की स्थिति के लिए उपयुक्त है. हमारे ज्ञान करने के लिए कैसे ओ 2 एकाग्रता के परिवर्तन की दर सी. में प्रतिक्रिया को प्रभावित करती है एक व्यवस्थित जांच नहीं किया गया है एलिगेंस.
- Hypoxic शर्तों के संपर्क में कीड़े सामान्यतः अगर प्लेट की सतह से बचने. इस को रोकने के लिए, प्लेटों के किनारे के आसपास palmitic एसिड (10 / इथेनॉल में मिलीग्राम मिलीग्राम) की एक अंगूठी जगह है. palmitic एसिड समाधान के बाहर इथेनॉल evaporates के रूप में आ जाएगा एक भौतिक बाधा के गठन. Palmitic एसिड बाधाओं अंडे बिछाने, उपजाऊपन या सी में उम्र की दर को प्रभावित नहीं करते 16,17 एलिगेंस. बुरोइंग अधिक बार hypoxic की स्थिति में नहीं होती है, तो अतिरिक्त preventative उपायों को आम तौर पर आवश्यक नहीं हैं.
- गैरवरीय निमेटोड विकास मीडिया (एन जी एम) 18 प्लेट पर एक alkaline ब्लीच समाधान की एक छोटी सी बूंद में सगर्भ वयस्कों विरंजन द्वारा सिंक्रनाइज़ आबादी उत्पन्न करता है. मानक बड़े बैच हाइपोक्लोराइट विरंजन प्रोटोकॉल के विपरीत, एक एन जी एम थाली की सतह पर ब्लीच समाधान की एक बूंद में 1-100 जानवरों लेने के लिए, तो ब्लीच समाधान प्लेट में अवशोषित करने की अनुमति
- Hypoxia के लिए प्रक्षालित भ्रूण को उजागर से बचें, के रूप में इस 13 व्यवहार्यता को कम कर सकते हैं. युवा भ्रूण (2-4 कोशिकाओं) इकट्ठा करने के लिए, गर्भवती वयस्कों एक रेजर ब्लेड और भ्रूण hypoxia के बाद प्रदर्शन के लिए मुंह pipet से प्लेटों के लिए ले जाया के साथ पानी की एक छोटी मात्रा में कटा हुआ जा सकता है.
- गैरवरीय निमेटोड विकास मीडिया (एन जी एम) 18 प्लेट पर एक alkaline ब्लीच समाधान की एक छोटी सी बूंद में सगर्भ वयस्कों विरंजन द्वारा सिंक्रनाइज़ आबादी उत्पन्न करता है. मानक बड़े बैच हाइपोक्लोराइट विरंजन प्रोटोकॉल के विपरीत, एक एन जी एम थाली की सतह पर ब्लीच समाधान की एक बूंद में 1-100 जानवरों लेने के लिए, तो ब्लीच समाधान प्लेट में अवशोषित करने की अनुमति
- पर्यावरण कक्ष में प्लेटें सील. नियंत्रण जानवरों के इलाज के कीड़े के रूप में एक ही तापमान पर normoxia (घर हवा) में रखा जाना चाहिए. घर हवा में छोड़ दिया नमूने और घर हवा उन पर बहने के साथ एक समान कक्ष में रखे गए लोगों के बीच कोई प्रत्यक्ष फर्क है. गैस प्रवाह आरंभ और बनाए रखने के वांछित समय के लिए जोखिम. रैंप में एकरूपता सुनिश्चित करने के लिए सुनिश्चित होप्रदर्शन से पहले गैस धोने बोतल में पानी की जगह.
- भ्रूण की परख के अस्तित्व के लिए, कीड़े कमरे में हवा के लौटने के बाद 48 घंटे के लिए विकसित करने के लिए अनुमति देते हैं, पर जो बात वे चौथे चरण लार्वा / एक वयस्कों दिन होना चाहिए. कुल के लिए अस्तित्व, रोक लगाए किसी भी कीड़े कि के लिए जिम्मेदार नहीं किया जा सकता है.
- Hypoxia के लिए संपर्क में पशुओं कल्पना करने के लिए, एक 22 मिमी 2 coverslip पर M9 की एक बूंद के लिए कीड़े चाल, और 18 M9 में agarose 2% की एक पैड पर औंधा. यदि आवश्यक हो, (25 मिमी) levamisole या azide सोडियम (10 मिमी) चतनाशून्य करनेवाली औषधि के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. सोडियम azide और levamisole कुछ विषाक्तता के कारण टिप्पणियों को उलझाना और विवेकपूर्ण तरीके से 19 इस्तेमाल किया जा सकता है.
5. Hypoxia उजागर कीड़े (HIF-1 पश्चिमी विश्लेषण के लिए नमूने की तैयारी उदाहरण) की तेजी से फसल
कई hypoxia प्रेरित प्रभाव जल्दी से कमरे में हवा के लौटने पर उलट अंडा 12 उत्पादन, mitotic epitopes की phosphorylation की बहाली भी शामिल है,HIF-1 प्रोटीन 9,20 में embryogenesis 13 और गिरावट में. Hypoxia के लिए संपर्क में पशुओं के तेजी से अलगाव के इन शर्तों में प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रभाव प्राप्त करने के लिए आवश्यक है. इस सेटअप के साथ जानवरों और काटा जा सकता है कम से कम दो मिनट में तरल नाइट्रोजन में जमे हुए है. जबकि दस्ताने बॉक्स hypoxia के कक्षों anoxic परिस्थितियों में नमूनों में हेरफेर के लिए अनुमति देते हैं, अपने और अनॉक्सिता से अन्य शर्तों के लिए लागत और व्यावहारिकता उनकी उपयोगिता सीमित.
- 4 10 सेमी उच्च वृद्धि प्लेटें (पारा) पर ब्रिस्टल N2 कीड़े आगे बढ़ें तक कीड़े की एक बहुमत सगर्भ वयस्कों 18 कर रहे हैं. 15 एमएल शंक्वाकार 01:05 क्षारीय ब्लीच समाधान युक्त ट्यूब कीड़े धो और रोटेशन के साथ सेते हैं जब तक कीड़े को भंग करने के लिए, 9 5 मिनट से अधिक नहीं लगते. कीड़े M9 के साथ तीन बार धो, कोई ब्रेकिंग साथ प्रत्येक धोने के बीच 1500 XG पर नीचे कताई.
- 8 150 मिमी एन जी एम प्लेटों पर थाली प्रक्षालित भ्रूण और L4 लार्वा (~ 22 में 48 के ब्रिस्टल N2 के लिए घंटे डिग्री सेल्सियस) को विकसित करने की अनुमति है.पर्यावरण कक्ष में प्लेटें ले जाएँ और (1,000 पीपीएम, 5000 पीपीएम) hypoxic और 4 घंटे के लिए anoxic (N2) शर्तों को बेनकाब. जोखिम बार प्रयोगात्मक डिजाइन के आधार पर अलग अलग होंगे. जबकि hypoxia के लिए जोखिम अंडे बिछाने की दर पर एक तत्काल प्रभाव पड़ता है, दो सेल भ्रूण 12 जोखिम के 16-18 घंटे के बाद मर जाते हैं. इस hypoxia के कक्ष स्थापना के साथ, जोखिम के कम सीमा संतुलन तक पहुँचने के लिए आवश्यक वातावरण विनिमय की दर से विवश है.
- लेबल एक 1.5 एमएल microfuge ट्यूब और एक प्रत्येक प्रायोगिक नमूना के लिए 15 एमएल चोटीदार ट्यूब. Hypoxia के लिए संपर्क में कीड़े अधिक कटाई के दौरान ट्यूब के पक्ष छड़ी की संभावना है. इसे रोकने के लिए, प्रत्येक 15 एमएल चोटीदार ट्यूब में 1% सोडियम dodecyl के सल्फेट (एसडीएस) के 100 μL जगह. यदि एसडीएस बहाव अनुप्रयोगों को रोकता है, गोजातीय सीरम albumin (BSA) करने के लिए चिपके को रोकने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. एसडीएस या BSA के नियमित प्रयोग के लिए एक स्पष्ट अंतर है प्रतीत नहीं होता. 2x प्रोटीन लोड हो रहा है डाई (4% एसडीएस, 10% 2 - Mercaptoethanol और एक के 50 μl जोड़ें30% ग्लिसरॉल (w / वी) 1.5 एमएल microfuge ट्यूब) में bromphenol नीले रंग का पता लगा. तरल नाइट्रोजन का एक देवर तैयार है.
- Hypoxia और रिकॉर्ड से कीड़े को हटाने के बाद चरणों का समय. Hypoxic कक्ष ढक्कन हटाएँ, एक नमूना थाली ले, और कक्ष reseal करने. एक नायलॉन फिल्टर पर कीड़े धोने और फिर 15 एमएल चोटीदार ट्यूब में डाल आसुत जल का उपयोग करें. कीड़े ब्रेक के साथ 15-20 सेकंड के लिए 1500 XG पर एक डेस्कटॉप अपकेंद्रित्र में स्पिन नीचे.
- एक निर्वात का उपयोग करने के लिए ट्यूब से सतह पर तैरनेवाला के सबसे निकालने के लिए, कीड़ा गोली अछूता जा.
- एक विंदुक का प्रयोग, 1.5 एमएल microfuge ट्यूब में 50 μL में कीड़ा गोली चाल. सील ट्यूब और तरल नाइट्रोजन में ध्यानमग्न करना.
- दोहराएँ जब तक सभी नमूनों को अलग किया गया है. स्थिरता के लिए घर हवा नियंत्रण नमूने के लिए इन प्रक्रियाओं का पालन करें. नमूने -20 डिग्री सेल्सियस पर भंडारित किया जा सकता है
6. प्रतिनिधि परिणाम
Hypoxia के organismal प्रभाव देखा जा सकता हैसी. की वयस्कता करने के लिए व्यवहार्यता की जांच करने के द्वारा एलिगेंस (चित्रा 2). जंगली प्रकार (N2) ब्रिस्टल (ia04) HIF-1 विलोपन म्यूटेंट द्वारा रखी भ्रूण सब घर हवा हे 2 सांद्रता (210.000 पीपीएम 2 हे) में बच रहे हैं. एन 2 कीड़े के लिए अनुकूल है और ५००० पीपीएम 2 हे में वयस्कता के जीवित रहने में सक्षम हैं, जबकि HIF-1 भ्रूण व्यवहार्य नहीं कर रहे हैं. इससे पता चलता है कि HIF-1 10 वातावरण में उपलब्ध ऑक्सीजन का स्तर बदलने के लिए अनुकूल करने के लिए आवश्यक है. न N2 न HIF-1 पशुओं के लिए जोखिम १,००० पीपीएम 2 हे जीवित रह सकते हैं.
कीड़ा hypoxia में सीधे visualizing के एक विदारक गुंजाइश है और स्पष्ट कंटेनर (चित्रा 3) के उपयोग के साथ संभव है. सीधे विदारक गुंजाइश पर hypoxia के कक्ष रखने से, वहाँ के लिए hypoxia से कीड़े निकालने organismal प्रतिक्रियाओं का पालन की जरूरत नहीं है. गुंजाइश प्रतिदीप्ति illumation साथ फिट किया जा सकता है (के रूप में चित्रा 3 में
आकृति 1. Hypoxia चैम्बर गैस के प्रवाह की दिशा का उदाहरण तीर द्वारा संकेत दिया है. गैस परिभाषित हे 2 (1) सांद्रता और एक दो चरण नियामक (2) जुड़ा हुआ है के साथ संकुचित गैस टैंक में संग्रहीत किया जाता है. गैस प्रवाह ट्यूब (3) के नीचे में प्रवेश करती है, सही प्रवाह की दर के शीर्ष पर बाहर निकलने. गैस तो बुलबुला कुप्पी (4) में बहती है, गैस (बुलबुला कुप्पी के बुलबुले देख कर सही कनेक्शन सुनिश्चित करने के) हाइड्रेिंग. हाइड्रेटेड गैस तो इनफ्लो वाल्व (5) में hypoxia के कक्ष में गुजरता है, hypoxia के लिए नमूने को उजागर. गैस निकास कक्ष में drilled छेद के माध्यम से कमरे में vents के अंत में.
चित्रा 2. हज़ार पीपीएम 2 हे, 5000 पीपीएम हे उजागर करने के लिए भ्रूण की व्यवहार्यता
चित्रा 3. सी. के दृश्य माइक्रोस्कोपी के साथ hypoxia में एलिगेंस कीड़े उल्लिखित तरीकों का उपयोग कर hypoxia को उजागर कर रहे हैं. पारदर्शी पर्यावरण कक्ष (एक pyrex crystallization के पकवान और गिलास प्लेट के निर्माण के साथ) सीधे एक विदारक गुंजाइश के मंच पर रखा गया है. दो विचारों से पता चला रहे हैं, एक सहित संपूर्ण गैस प्रवाह स्थापित, बस खुर्दबीन मंच पर चैम्बर के साथ अन्य.
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Discussion
यह विधि एक hypoxic वातावरण है कि ऑक्सीजन की सटीक प्रयोगशाला में बनाए रखा जाना सांद्रता के साथ वातावरण के लिए अनुमति देता है के निर्माण के लिए एक रणनीति प्रस्तुत करता है. इन कक्षों 2 हे विशिष्ट कम सांद्रता को उजागर जीवों और आणविक और शारीरिक outputs की निगरानी के लिए एक सरल तरीका प्रदान करते हैं. पर्यावरण वर्णित कक्ष के बजाय वाणिज्यिक खरीदा प्रयोगशाला द्वारा इकट्ठा किया है और इस प्रकार प्रयोग की जरूरत है फिट करने के लिए संशोधित किया जा सकता है.
इस विधि का एक विशिष्ट लाभ सतत प्रवाह डिजाइन है. यह सामान्य रूप से कक्षों में 2 हे की कम मात्रा को बनाए रखने जब बाहरी हे 2 एकाग्रता बहुत अधिक है (कमरे में हवा में 210.000 पीपीएम 2 हे) के साथ सामना कठिनाइयों को समाप्त. वैकल्पिक एक विधि को बंद कर दिया प्रवाह है, जो एक hypoxic पर्यावरण एक सीलबंद कक्ष में बनाए रखा है है. यहां तक कि छोटे लीक, जो मुश्किल हो सकता है पता लगाने के लिए कर सकते हैं पूर्वhypoxic रोका प्रवाह तरीकों का उपयोग कर शर्तों के रखरखाव वेंट. निरंतर प्रवाह विधि परिभाषित संपीड़ित हवा टैंक में ऑक्सीजन एकाग्रता के साथ कक्ष में लगातार हवा आदान - प्रदान और एक सकारात्मक दबाव है कि hypoxic स्थितियों में खलल न डालें लीक रोकता रखता है.
सटीक, पूर्व मिश्रित गैस आपूर्तिकर्ता से ऑक्सीजन सांद्रता को प्राप्त करने के hypoxia के साथ एक और मुश्किल समस्या हल करती है. 2 हे की बहुत कम सांद्रता उपाय यह काफी मुश्किल है. हाल हे 2 सेंसर सीमित प्रसार और काफी महंगे हैं. ओ 2 diffuses क्योंकि धीरे - धीरे, कम मापने के ओ 2 सांद्रता धीमी गति से या गलत हो सकता है 21. इसके विपरीत, यह काफी आसान है गैस के मिश्रण करने के लिए gasses के वजन को मापने के द्वारा उत्पन्न. मिश्रण हम नियमित रूप से खरीद मानक प्रमाणित कर रहे हैं वांछित मिश्रण की 2 सामग्री के ओ 2% के भीतर हो.
इस पद्धति का के नमूदार घंटे प्रकाश में लाना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता हैorganismal और आणविक स्तर पर दोनों ypoxia परिवर्तन प्रेरित. हालांकि इस पद्धति का अस्तित्व assays और तेजी से आणविक प्रयोगों के लिए पूरी कीड़ा अलगाव की रूपरेखा, वहाँ असंख्य बहाव readouts में है कि इस्तेमाल किया जा सकता है. उदाहरण के लिए, इस डिजाइन वास्तविक समय व्यवहार और रिपोर्टर constructs के लिए परिवर्तन के अध्ययन के लिए hypoxia में कीड़े की दिशा दृश्य के लिए अनुमति देता है. कल्पना एक विदारक गुंजाइश के साथ कीड़े, छोटी मात्रा और कम से कम ऊंचाई के साथ पारदर्शी बक्सों का उपयोग कर कक्ष इकट्ठा. पूरे कक्ष विदारक गुंजाइश पर रखा जा सकता है और आसानी से इष्टतम दृश्य के लिए, maneuverable है (देखें चित्र 3). यह भी संभव हो सकता है एक उलटा माइक्रोस्कोप के साथ छिड़काव कक्षों का उपयोग करके उच्च बढ़ाई नमूने निरीक्षण होगा. इस टयूबिंग है कि सामान्य रूप से गैस प्रवाह के लिए इस्तेमाल किया जाता है के साथ इंटरफेस के लिए कक्षों की कुछ अनुकूलन की आवश्यकता है, और एक उचित प्रवाह की दर का निर्धारण. प्रतिनिधि दिखाया परिणाम केवल प्रयोगात्मक possibi की सतह खरोंचlities, hypoxia के रूप में डीएनए संश्लेषण से प्रोटीन 22,23 गिरावट सेलुलर प्रणालियों को प्रभावित दिखाया गया है.
इस पद्धति का व्यावहारिक प्रकृति सी. तक सीमित नहीं है एलिगेंस. के रूप में लंबे समय के रूप में उपयुक्त के आकार कक्षों को उपयोग किया जाता है, इस विधि को आसानी से लगभग किसी भी मॉडल प्रणाली के लिए अनुकूलनीय है. तरल मीडिया या सेल संस्कृति, समाधान में ऑक्सीजन प्रसार स्थिरांक, प्लास्टिक और संस्कृति में संतुलित करना समय से outgassing अनुकूलन के लिए खाते में लिया जाना चाहिए, और यह सबसे उपयुक्त ओ 2 पारगम्य संस्कृति प्लेटों 24,25 उपयोग हो सकता है.
यह संभव है अन्य gasses के साथ प्रयोग के लिए इस प्रोटोकॉल में प्रस्तुत कक्षों को संशोधित. उदाहरण के लिए, कक्षों hypoxia के कक्ष (नाइट्रोजन से भरा जा रहा है संतुलन के साथ) बनाने के लिए इस्तेमाल किया संकुचित गैस टैंक में 2 हे omitting की केवल एक anoxic वातावरण प्रदान करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. यह सी. के अवलोकन के लिए अनुमति दी गई है Susp के में एलिगेंससमाप्त एनीमेशन 10,13,26 (नहीं दिखाया डेटा). थोड़ा संशोधन गैस इस्तेमाल किया मिश्रण का गुण के आधार पर किया जाना चाहिए. में और कक्ष के बाहर पाइप गैस के लिए इस्तेमाल किया टयूबिंग की संरचना करने के लिए अलग किया जा सकता है. कुछ प्लास्टिक सीओ 2 के लिए प्रवेश के योग्य हैं, जबकि दूसरों यह संक्षारक gasses में हाइड्रोजन (एच 2 एस) सल्फाइड 16,26 के साथ संगत नहीं हैं. संगत प्लास्टिक की एक सूची कोल - परमार वेबसाइट पर पाया जा सकता है.
विषाक्त gasses के लिए कक्ष से गैस आउटलेट एक प्रमाणित धूआं हुड और डिटेक्टरों के रूप में उचित निजी सुरक्षा में दिए जाना चाहिए नियोजित किया जाना है. इसके अतिरिक्त, एह और एस अधिकारियों को किसी भी संभावित खतरनाक gasses का उपयोग करके प्रयोग शुरू होने से पहले परामर्श किया जाना चाहिए. संक्षारक gasses भी विशेष ध्यान देने की आवश्यकता हो सकती है. उदाहरण के लिए, एच 2 एस मानक टयूबिंग सामग्री में के रूप में के रूप में अच्छी तरह से पीतल फिटिंग खुरचना जाएगा इस्तेमाल प्लास्टिक के कई खुरचना कर सकते हैं. हम आम तौर पर यकीन है कि कि किसी भी गीला करटेड प्लास्टिक Kalrez या एच 2 एस के साथ इस्तेमाल किया उपकरणों में बराबर है कुछ gasses में नल का पानी दोष के साथ बातचीत कर सकते हैं, तो Dih 2 0 बुलबुला कुप्पी में इस्तेमाल किया जाना चाहिए. विशेष कांच के बने पदार्थ के विषय में विचार भी आवश्यकता हो सकती है, उदाहरण के लिए, एच 2 एस O-अंगूठी के साथ गीला उपकरण आवश्यक है.
दोनों organismal और आणविक परिवर्तन प्रयोगों जो एक दिन में पूरा किया जा सकता का उपयोग मनाया जाता है. यह करने के लिए तेजी से hypoxia के लिए नमूनों को लागू करने की क्षमता से उम्र बढ़ने और कैंसर के विकास के लिए क्षेत्र में एक महत्वपूर्ण उपकरण उपलब्ध कराता है.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
हम चर्चा और पांडुलिपि के महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए मिलर प्रयोगशाला के सदस्यों को धन्यवाद. यह काम DLM और राष्ट्रीय संस्थानों स्वास्थ्य R00 पुरस्कार DLM AG030550 की उम्र बढ़ने के मूल जीव विज्ञान में उत्कृष्टता के नातान शॉक केंद्र से नई अन्वेषक पुरस्कार द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tubing (FEP and PTFE) | Cole Parmer Tygon | YO-95821-00 (1/8" FEP) 06605-27 (1/16 x 1/8" PTFE)’ R-3603 | |
| Compression fittings | Seattle Fluid Systems | 06363-58 (M. coupler 1/16") 06363-62 (F. coupler 1/16") 06363-60 (M. coupler 1/8") 06363-61 (F. coupler 1/8") | |
| Flow tube | Aalborg | PMR3-010073 (3 output) PMR1-013520 (1 output) | |
| Mass flow controller | Sierra Instruments | 810S-L-DR-2-OV1-SK1-V1-S1 (Mass Trak) C100L-DD-2-OV1-SV1-PV2-V1-SO-C10 (Smart Trak 2) | |
| Compressed gas tank | AirGas | Made to order | |
| Plastic male Luer to hose barb fittings | Cole Parmer | 45505-41 (500 series 1/16") | |
| Cast acrylic boxes | Ellard Instrumentation | Made to order | |
| Pipe fittings (Brass or stainless steel) | Seattle Fluid Systems | B-402-1 (1/4" nut) B-200-3 (1/8" union tee) B-400-set (1/4" ferrules) B-QM2-B1-200 (QM Body QC) B-200-1-2 (1/8 x 1/8" male conn) | |
| Dow Corning Vacuum Grease | Sigma-Aldrich | Z273554 | |
| AnaeroPack box | Misubishi Gas Chemical Company | R684004 (0.4 liter) R685025 (2.5 liter) R685070 (7.0 liter) | |
| Pyrex gas wash bottle | Sigma-Aldrich | CLS31770500C (500 mL) CLS31770250C (250 mL) CLS31770125C (125 mL) | |
| Palmitic acid | Sigma-Aldrich | P0500 | |
| Goat anti-mouse IgG-horseradish peroxidase | Southern Biotechnology Associates | 1032-05 | |
| SuperSignal West Pico Chemiluminsecent Substrate | Pierce Chemical | 34077 | |
| 100 x 50 glass crystallization dishes | Kimax Kimble | 23000 |
References
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