Transformation bactérienne : la méthode du choc thermique

La transformation est un processus qui apparait lorsqu’une cellule ingère un ADN étranger depuis son entourage. La transformation peut se produire dans la nature dans certains types de bactérie. En biologie moléculaire, la transformation est reproduite artificiellement au labo via la création de pores dans les membranes des cellules bactériennes. Les cellules bactériennes qui sont capables de prendre l’ADN depuis l’environnement sont appelées cellules compétentes. Au laboratoire, les cellules bactériennes peuvent être rendues compétentes et l’ADN peut par la suite être introduit par une procédure appelée méthode du choc thermique.

La transformation par choc thermique utilise un environnement riche en calcium fournit par du chlorure de calcium pour contrer la répulsion électrostatique entre l’ADN plasmidique et la membrane cellulaire bactérienne. Une augmentation soudaine en température crée des pores dans la membrane plasmique de la bactérie et autorise l’ADN plasmidique à entrer dans la cellule bactérienne. Cette vidéo passe en revue une procédure pas à pas sur comment créer des bactéries chimiquement compétentes, réaliser une transformation par choc thermique, mettre en plaque les bactéries transformées, et calculer l’efficacité de la transformation.