JoVE Science Education
Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo.  Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
Bacterial Transformation: The Heat Shock Method
  • 00:00Visão Geral
  • 00:50Basic Principles of Heat Shock Transformation
  • 03:34The Heat Shock Reaction
  • 06:26Preparing Competent Cells
  • 08:38Applications
  • 10:36Summary

Transformação Bacteriana: O Método de Choque térmico

English

COMPARTILHAR

Visão Geral

Transformação é o processo que ocorre quando uma célula ingere DNA estranho de seu entorno. A transformação pode ocorrer na natureza em certos tipos de bactérias. Na biologia molecular, a transformação é artificialmente reproduzida em laboratório através da criação de poros em membranas celulares bacterianas. Células bacterianas capazes de tirar DNA do ambiente são chamadas de células competentes. Em laboratório, as células bacterianas podem ser competentes e o DNA posteriormente introduzido por um procedimento chamado método de choque térmico.

A transformação do choque térmico usa um ambiente rico em cálcio fornecido pelo cloreto de cálcio para neutralizar a repulsão eletrostática entre o DNA plasmóide e a membrana celular bacteriana. Um aumento repentino na temperatura cria poros na membrana plasmática das bactérias e permite que o DNA plasmídeo entre na célula bacteriana. Este vídeo passa por um procedimento passo a passo sobre como criar bactérias quimicamente competentes, realizar a transformação do choque térmico, emplacar as bactérias transformadas e calcular a eficiência da transformação.

Procedimento

A transformação bacteriana é um método amplamente utilizado onde o DNA estranho é introduzido em uma bactéria, que pode então amplificar, ou clonar o DNA. Células que têm a capacidade de facilmente pegar este DNA são chamadas células competentes. Embora a transformação esteja ocorrendo naturalmente em muitos tipos de bactérias, os cientistas encontraram maneiras de induzir artificialmente e melhorar a competência de uma célula bacteriana. Neste vídeo vamos falar sobre uma dessas maneiras, a transforma…

Declarações

No conflicts of interest declared.

Transcrição

Tags

Cite This
JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Bacterial Transformation: The Heat Shock Method. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

Vídeos Relacionados