Diermodellen van pediatrische ziekte vroeg begin en agressieve ziekteprogressie ervaren. Klinisch relevante afgifte van therapie aan jonge muismodellen kan zijn technisch moeilijk. Dit protocol beschrijft een niet-invasieve werkwijze voor intraveneuze injectie pasgeboren muizen binnen de eerste twee dagen postnatale leven.
Intraveneuze injectie is een klinisch toepasbare wijze therapeutica leveren. Voor volwassen knaagdieren en grotere dieren, intraveneuze injecties zijn technisch haalbaar en routine. Echter, sommige muismodellen vroeg begin van de ziekte met een snelle progressie dat toediening van mogelijke therapieën bemoeilijkt hebben. De tijd (of gezicht) ader anterieure oordopje in muizen en duidelijk zichtbaar is voor de eerste twee dagen na de geboorte aan weerszijden van de kop met een dissectie microscoop. Tijdens dit venster kan de temporale ader worden geïnjecteerd met volumes tot 50 pl. De injectie is veilig en goed verdragen door zowel de pups en de dammen. Een typerende injectieprocedure voltooid binnen 1-2 min, waarna de pup terug naar hun kooi. Door de derde postnatale dag de ader is moeilijk te visualiseren en de injectie procedure wordt technisch onbetrouwbaar. Deze techniek is gebruikt voor aflevering van adeno-geassocieerd virus (AAV) vectors, waardoor nagenoeg de gehele body, stabiele expressie van transgenen kan voor de levensduur van het dier, afhankelijk van het virale serotype gekozen.
Levering van therapieën voor het centrale zenuwstelsel (CNS) in muismodellen van pediatrische ziekte blijft een uitdaging. Muizen die model pasgeboren ziektetoestanden zijn ondermaats en ontwikkelingsgebied onvolwassen en daarom moeilijk direct te injecteren in relevante structuren in het CZS. Intravasculaire injectie van therapeutische middelen is een niet-invasieve, goed verdragen methode cellen, drugs of virale vectoren leveren aan het hele lichaam inclusief het CZS 1-5 en retina 3,5-9. Vorige publicaties beschrijven temporale gezicht ader injectie met behulp van een transilluminator 10,11, zonder een dissectie microscoop 11,12, of waarbij twee personen om te injecteren 10. De in dit protocol beschreven injectietechniek is voordelig omdat een enkel individu pups kunnen injecteren, en de lichtbron om te bekijken de temporale ader wordt niet aanraken van de pup, waardoor de noodzaak voor chirurgische tape of de bevestiging van een pup op vaste ondergrondzoals een transilluminator 11. Aflevering van adeno-geassocieerde virale vector serotype 9 (AAV9) bij muizen produceert robuuste expressie in neuronen en astrocyten gehele hersenen en ruggenmerg (figuur 1). Intravasculaire levering van virale vectoren in de oppervlakkige temporale gezicht ader is betrouwbaar die in verschillende studies in neonatale muizen om de pediatrische neuromusculaire aandoening Spinale musculaire atrofie (SMA) 2,4,13,14 behandelen en uiteindelijk meer de levensduur van de behandelde muizen.
Intravasculaire injectie van pasgeboren muizen ook effectief richt het perifere zenuwstelsel en perifere organen (figuur 2). Na injectie van AAV is transductie van dorsale wortel ganglia, lever, hart, skeletspier, long en myenterische plexus van de darm waargenomen 1,3,6,7,15. Wijdverspreide transductie van de CNS en periferie maakt deze methode van injectie ideaal voor ziekten waarbij wereldwijde uiting vaneen transgen, zoals de ziekte van Gaucher 16 en andere lysosomale stapelingsziekten 17,18, de ziekte van Batten en verwante neuronale ceroid lipofuscinosen, 19 en Bardet-Biedl syndroom, een genetische stoornis in met begin van symptomen Tijdens de vroege kindertijd 20. Intravasculaire injectie in neonatale muizen moeten worden beschouwd als een nieuwe werkwijze modelleren systeembrede kinderziekten. Deze techniek is vertaald grotere diermodellen 5,21 en intravasculaire injectie bestaat als klinisch aanvaardbare werkwijze voor het afgeven therapeutica.
Het huidige protocol beschrijft een eenvoudige, efficiënte methode van het leveren van agenten om neonatale muizen door de oppervlakkige temporale gezicht ader uiterlijk postnatale dag 2. Injectie kan worden ingevuld door een enkele, oefende individueel en wordt goed verdragen door zowel de pups en de dammen. Pups ervaren minimale nood en snel te herstellen. ImportanTLY, zal succesvolle injectie resulteren in wereldwijde levering van het middel toegediend. Dit protocol is geschikt voor afgifte van virale vectoren, farmaceutische middelen of cellen pasgeboren muizen.
Intravasculaire afgifte van middelen aan het CNS of het hele lichaam moeilijk in neonatale muizen modellen van ziekte. De beschreven protocol is een snelle, relatief niet-invasieve manier intraveneus oplossingen in neonatale muizen met minimale uitrusting vereisten beheren. Hoewel de temporele gezicht ader kan worden bekeken met het blote oog kunnen injecties grotere nauwkeurigheid hebben met het gebruik van de microscoop en vezeloptische lichtbron, met name voor een ongeoefende injector. Intravasculaire injectie in neo…
The authors have nothing to disclose.
De auteurs willen de NINDS, FightSMA en Families van SMA erkennen voor financiële steun. Segl wordt ondersteund door NINDS training subsidie # 5T32NS077984-02.
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Thinpro Insulin Syringe | Terumo | SS30M3009 | 3/10cc, 3/8" needle, 30G, 1 per mouse |
Evans Blue Dye | Sigma-Aldrich | E2129 | Dilute to 1% with 1X Phosphate Buffered Saline |
Cotton Tipped Applicators | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
Fiber Optic Light Source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
Dissecting Microscope |