Here we present methodology for the production of a focal stroke in murine white matter by local injection of an irreversible endothelial nitric oxide synthase (eNOS) inhibitor (L-Nio). Presented are two stereotactic variations, retrograde neuronal tracing, and fresh tissue labeling and dissection that expand the potential applications of this technique.
السكتة الدماغية تؤثر على حسابات المادة البيضاء لمدة تصل إلى 25٪ من العروض السكتة الدماغية السريرية، ويحدث بصمت بمعدلات قد تكون أكبر 5-10 أضعاف، ويساهم بشكل كبير في تطوير الخرف الوعائي. نماذج قليلة من التنسيق السكتة الدماغية المادة البيضاء موجودة وهذا النقص في نماذج مناسبة أعاق فهم الآليات neurobiologic العاملة في مجال الاستجابة الإصابة وإصلاح بعد هذا النوع من السكتة الدماغية. القيد الرئيسي من نماذج السكتة الدماغية تحت القشرية الأخرى هو أنها لا تقيد الوزراء البريطانى واحتشاء إلى المادة البيضاء أو تم التحقق من صحتها في المقام الأول في الأنواع غير الفئران. وهذا يحد من القدرة على تطبيق مجموعة واسعة من الأدوات البحثية الفئران لدراسة بيولوجيا الأعصاب من السكتة الدماغية المادة البيضاء. هنا نقدم منهجية لإنتاج موثوق من السكتة الدماغية التنسيق في المادة البيضاء الفئران باستخدام حقن المحلي لالمانع أنوش لا رجعة فيه. نقدم أيضا العديد من الاختلافات على بروتوكول عام من بينهم اثنان من اللمسي فريدة من نوعهاالاختلافات، وتتبع الوراء العصبية، فضلا عن وضع العلامات الأنسجة الطازجة وتشريح تزيد كثيرا من التطبيقات المحتملة لهذه التقنية. هذه الاختلافات تسمح للمناهج متعددة لتحليل الآثار neurobiologic من هذا النوع الشائع ودراسة سلوكه من السكتة الدماغية.
Stroke affecting the subcortical white matter is a common clinical entity, accounting for up to 25% of clinical strokes annually in the US 1. Ischemic damage to white matter also occurs silently at a significantly higher rate and contributes to the development of vascular dementia 2,3. Presently, patients with this form of cerebral ischemia have few, if any treatment choices. Despite the clinical importance of this disease, few clinically relevant animal models exist 4,5.
The goal of this protocol is to produce a focal ischemic lesion within the murine white matter. This murine model of human disease allows the specific study of axonal injury response to stroke and how the cellular elements of white matter, namely oligodendrocytes and astrocytes along with axons, respond to and repair after stroke.
Previous reports have described a model of subcortical white matter stroke using endothelin-1 (ET-1) 6 that is similar to the one described here. Several key changes to the experimental protocol have been made thereby the potential uses of this model have expanded 7,8. This protocol provides a reliable and modifiable strategy to produce a focal stroke within mouse brain white matter.
The major advantages of this model are the use of a chemical endothelial nitric oxide synthase (eNOS) inhibitor N(5)-(1)-iminoethyl-L-ornithine HCl (L-Nio) 9 with no known paracrine effects on cellular elements of white matter which had been a complication of models using endothelin-1 10. In addition, the stereotactic targeting of white matter in the mouse allows the use of any variety of transgenic or knockout strains, greatly expanding the available tools to determine the effect of stroke on brain white matter. Here, two variations on this technique are described and demonstrate some of the additional variations that can be utilized to enhance the understanding of axonal and white matter damage and repair after stroke.
وقد وصف عدد من النماذج السابقة من السكتة الدماغية تحت القشرية بما في ذلك حقن محورية في endothelin-1 في الكبسولة الداخلية، المادة البيضاء تحت القشرية والمخطط في الفئران 12-14 والفأر 6،15. وقد استخدمت المزيد من النماذج الأخيرة من السكتات الدماغية التنسيق صغيرة الكو…
The authors have nothing to disclose.
تلقى SN وMDD بدعم من المعاهد الوطنية للصحة K08 NS083740 ووزارة جامعة كاليفورنيا لعلم الأعصاب. يعترف AJG الدعم من قبل الدكتورة مريم ومؤسسة شيلدون أديلسون زاي للبحوث الطبية ومؤسسة لاري ل Hillblom. KLN بامتنان بدعم من مركز السكتة الدماغية القلب الأمريكية رابطة 14BFSC17760005 ASA-Bugher. ودعمت سوء، السلع والخدمات البيئية وشركة الاتصالات السعودية من قبل المعاهد الوطنية للصحة R01 NS071481. يعترف JDH بدعم من المعاهد الوطنية للصحة K08 NS083740.
L-N5-(1-Iminoethyl)ornithine, Dihydrochloride | Calbiochem | 400600-20MG | |
Isoflurane | Phoenix Pharmaceutical, Inc. | NDC 57319-559-06 | |
Capillary tubes | World Precision Instruments | 50-821-807 | |
Picospritzer | Parker Instrumentation | Picospritzer II | |
Stereotactic setup | Kent Scientific | KSC51725 | |
Pipette puller | KOPF | Model 720 | |
Stereomicroscope SZ51 | Olympus | 88-124 | |
Fine scissors | Fine Scientific Tools | 14084-08 | |
Forceps | Harvard Apparatus | PY2 72-8547 | |
Curved Forceps | Harvard Apparatus | PY2 72-8598 | |
Blunt dissection tool | Fine Scientific Tools | 10066-15 | |
Drill | Dremel | 8220-1/28 | |
Drill bits | Fine Scientific Tools | 19007-05 | |
Vetbond | 3M | 1469SB | |
Marcaine | HOSPIRA | NDC 0409-1610-50 | |
Trimethoprim-Sulfamethaxole | STI Pharmacy | NDC 54879-007-16 | |
Fluororuby | Fluorochrome Inc | 30mg | |
Paraformaldehyde | Fisher | O4042-500 | |
Sucrose | Fisher | BP220-10 | |
Cryostat | Leica CM3050 S | 14047033518 | |
Glass slides | Fisher | 12-544-7 | |
Fast Green | Sigma | F7252-5G | |
Dissection microscope | Nikon | SMZ1500 | |
23 gauge butterfly needle | Fisher | 14-840-35 | |
10X Hank's Balanced Salt Solution | Life Technologies | 14065056 | |
1M HEPES-KOH, pH 7.4 | Affymetrix | 16924 | |
D-Glucose | Sigma | G8270 | |
Sodium bicarbonate | Sigma | S5761 | |
Cyclohexamide | Sigma | 01810 |