Aqui nós descrevemos um método comum para induzir lesão hepática crônica em ratos, alimentando-se de uma dieta deficiente em colina e ethionine-complementado do (CDE). Demonstramos que o monitoramento de integridade, perfusão hepática, isolamento e preservação. Um curso de tempo de seis semanas pode informar sobre a lesão hepática, pathohistology, fibrose, inflamatória e respostas de células progenitoras de fígado.
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Artigo de método
O murino colina deficiente, Ethionine-completada (CDE) dieta modelo de lesão hepática crônica
Neste artigo
Resumo
Resumo
Doenças crônicas do fígado, como hepatite viral, doença hepática alcoólica ou doença hepática gordurosa não-alcoólica, são caracterizadas por inflamação contínua, destruição progressiva e regeneração da célula progenitora de parênquima hepático, fígado proliferação e fibrose. O estágio final de cada doença crónica do fígado é a cirrose, um importante factor de risco para o desenvolvimento de carcinoma hepatocelular. Para estudar os processos que regulam a progressão, estabelecimento e iniciação da doença, vários modelos animais são utilizados em laboratórios. Aqui descrevemos um curso de seis semanas de tempo do deficiente em colina e ethionine-completados (CDE) modelo de mouse, que envolve seis semana de idade camundongos C57BL/6J machos de alimentação com deficiente em colina chow e 0,15% DL-ethionine-completar água potável. Monitoramento da saúde animal e uma curva de perda de peso de corpo típica são explicados. O protocolo demonstra a análise bruta de uma coleção de fígado e sangue CDE-tratados por punção cardíaca para análises subsequentes de soro. Em seguida, a técnica de perfusão de fígado e coleção de diferentes lóbulos hepáticos para avaliações padrão são mostrados, incluindo histologia hepática avaliações por hematoxilina e eosina ou Sirius vermelho citológicas, imunofluorescência deteção de populações de células hepáticas assim como transcriptome perfilamento do microambiente do fígado. Este modelo de rato é adequado para estudar inflamatória, fibrogênicos e células progenitoras fígado dinâmica induzida através de doença hepática crônica e pode ser usada para testar potenciais agentes terapêuticos que podem modular a estes processos.
Introdução
O fígado é o maior órgão glandular de metabólico do corpo e tem muitas funções complexas. Papéis-chave para o fígado incluem a digestão, desintoxicação, metabolismo, armazenamento de nutrientes essenciais, produção de componentes de proteínas do plasma sanguíneo e imunidade mediada por macrófagos residentes ou células de Kupffer. O fígado tem uma grande capacidade de se regenerar mesmo que cerca de 70-90% da sua massa total é perdida. Em caso de lesão hepática aguda, como visto a seguir uma hepatectomy parcial ou paracetamol envenenamento, os restantes saudáveis hepatócitos proliferam para reparar os danos num processo altamente coordenada1. No....
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Protocolo
1. a experimentação animal
todos os estudos animais descritos nesta investigação foram aprovados pelo Comitê de ética Curtin University Animal (número de aprovação: AEC_2014_28) antes do início da experiências e executadas em conformidade com o código australiano para o cuidado e o uso de animais.
- Animais
- usar seis semana de idade camundongos C57BL/6J machos para os experimentos.
- Desenho experimental
- após chegada à instalação de Animal, permitem que os ratos se adapte para quatro dias antes do início de qualquer experimentos. Ratos de casa
- na cama ....
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Resultados
Ao longo do curso do tempo de seis semanas de lesão hepática crônica induzida pelo CDE, parâmetros foram avaliados nos dias 7 (fase de indução), 14 e 21 (fase de criação) e 42 (fase de manutenção). Comparado com o controle de ratos, camundongos tratados com CDE perderam até 20% de seu peso inicial em uma fase de adaptação inicial e tendem a recuperar o peso nas fases de estabelecimento e manutenção (Figura 1). O peso corporal foi inversamente.......
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Discussão
Doença hepática crônica é muitas vezes uma doença silenciosa com a maioria dos pacientes, sendo assintomática e é um dos maiores contribuintes para a morbidade e mortalidade em todo o mundo. Alcoolismo crônico e infecção pelo vírus da hepatite C são as principais causas. Lesão hepática crônica é caracterizada por inflamação hepática, fibrose e em casos severos cirrose, carcinoma e, finalmente, cirrose. Atualmente não existe cura disponível e embora grandes avanços foram feitos para compreender os mecanismos da doença hep.......
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Divulgações
Não há nada a ser divulgada pelos autores.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado por doações da saúde nacional e Conselho de pesquisa médica (NHMRC) da Austrália (APP1042370, APP1061332, APP1087125). Os autores gostaria de agradecer a equipe Curtin saúde inovação Research Institute para obter assistência técnica.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Camundongos C57BL/6J machos de seis semanas de idade | Centro de Recursos Animais da Austrália Ocidental, Murdoch, WA, Austrália | N/A | |
| 10 Kg Corte a Vapor Wheaten Chaff | Alimentos Especiais, Glen Forrest, WA, Austrália | N/A | |
| Água para irrigação garrafa de 1000ml (Baxter) | Surgical House, Perth, WA, Austrália | ||
| Dieta deficiente em colina, modificada (pellets) | MP Biomedicals Australasia Pty Limited, WA, Austrália 02960210 | ||
| DL-Etionina | Sigma-Aldrich, Castle Hill, NSW, Austrália | E5139-25G | |
| Ketamil injeção | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Austrália | N/A | |
| Ilum Xylazil-20 injeção | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Austrália | N/A | |
| 27G x 1/2", Agulha de Parede Regular | Terumo Australia Pty Limited, NSW, Austrália | NN-2713R | |
| Seringas Terumo 1ml e 10ml | Terumo Australia Pty Limited, Macquarie Park, NSW, Austrália | 1018242, 1018037 | |
| composto OCT Tissue-Tek | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Austrália | 25608-930 | |
| Formalina tamponada neutra | Amber Scientific, Midvale, WA, Austrália | NBF-2.5L | |
| Etanol absoluto anaLaR normalpur | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Austrália | 20821.33 | |
| Chinelos Superfrost Plus | Grale Scientific Pty Limited, Ringwood, VIC, Austrália | ||
| Dako Protein Block, sem soro | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Austrália | X090930-2 | |
| Diluente de anticorpos Dako | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Austrália | s0809 | |
| rato anti-CD45 | eBioscience, San Diego, Califórnia, EUA | m0701 | Diluição de 1/200 |
| coelho anti-panCK | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Austrália | Z0622 | Diluição 1/300 |
| Cabra anti-coelho (Alexa Fluor 488) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Austrália | A-11008 | Diluição 1/500 |
| Cabra anti-rato IgG (Alexa Fluor 594) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Austrália | A-11007 | diluição 1/500 |
| com DAPI | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Austrália | Pág. 36935 | |
| Kit de Mancha Vermelha Picrosirius | Polysciences Inc., Warrington, PA, EUA | ab150681 |
Referências
- Taub, R. Liver regeneration: from myth to mechanism. Nat Rev Mol Cell Biol. 5, 836-847 (2004).
- Kohn-Gaone, J., Gogoi-Tiwari, J., Ramm, G. A., Olynyk, J. K., Tirnitz-Parker, J. E. The role of liver progenitor cells during liver regeneration....
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Reimpressões e permissões
