שבב מבוסס תלת ממדי נייד תרבות Micro-bioreactors perfused
Summary
אנו מתארים פלטפורמת השבבים מבוססי לעיבוד תלת ממדי של תאים מיקרו bioreactors. אחת שבב יכול בית עד 10 Mio. תאים שיכולים להיות מעובדים בתנאים מוגדרים במדויק לגבי זרימת נוזלים, מתח וכו 'חמצן בלולאה, סטרילי במחזור סגור.
Abstract
פיתחנו שבב המבוסס על התרבות תאים של מערכת לעיבוד תלת ממדי של תאים. שבב מיוצר בדרך כלל מתוך אי – פולימרים מתכלים, למשל, פוליקרבונט או methacrylate polymethyl על ידי הזרקה מיקרו, הבלטות חם מיקרו או מיקרו Thermoforming. אבל, זה גם יכול להיות מיוצר מ – פולימרים ביו מתכלה. מימדים הכולל שלו הם 0.7 1 x 20 x 20 x 0.7 1 מ"מ (hxwxl). התכונות העיקריות של שבבים המשמשים הם או רשת של עד 1156 סמ"ק מיקרו מכולות (CF-chip) כל אחת בגודל של 120-300 x 300 x 300 μ (hxwxl) או גומחות עגול עם קוטר של 300 μ ועומק של μ 300 (r-chip). הפיגום יכול בית 10 Mio. תאים בתצורת תלת מימדי. עבור מזין אופטימלי אספקת גז, השבב מוכנס דיור bioreactor. Bioreactor הוא חלק לולאה סגורה מחזור steril כי בתצורה הפשוטה ביותר, מורכבת additionaly של משאבת הרים מאגר בינוני עם אספקת גז. Bioreactor ניתן להריץ זלוף, superfusion, או אפילו מצב הפעולה מעורבת. יש לנו מעובדות בהצלחה שורות תאים, כמו גם תאים ראשוניים על פני תקופות של מספר שבועות. עבור תאים עכברוש ראשוני בכבד יכולנו להראות שימור של פונקציות organotypic במשך יותר מ 2 שבועות. עבור קרצינומה קווי hepatocellular תא יכולנו להראות את אינדוקציה של גנים ספציפיים לא כבד או לידי ביטוי רק מעט בתרבות monolayer סטנדרטי. המערכת עשויה להיות שימושית גם כאשר תא גזע טיפוח מערכת מאז הניסויים בידול הראשון עם קווי בתאי גזע היו מבטיחות.
Protocol
Discussion
פיתחנו פלטפורמת השבבים מבוססי לעיבוד תלת ממדי של תאים bioreactors מיקרו perfused פעיל. השבבים יכולים להיות מיוצרים מ בלתי מתכלה, כמו גם פולימרים מתכלים על ידי הזרקה מיקרו, הבלטה חמה, כמו גם טכניקות thermoforming מיקרו 3. בהתאם לעיצוב ניסיוני, פני השטח של פולימר ניתן לשנות על ידי קרינת UV-4….
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ברצוננו להודות Mechthild Herschbach ואנקה Dech לקבלת סיוע טכני מעולה.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cells | Outro | ATCC | HB-8065 | |
| Collagen I from rat tail | Reagent | Roche Diagnostics | 11 179 179 001 | |
| PARIS kit | Reagent | Ambion Inc. | AM1921 | |
| Syto16 | Reagent | Invitrogen | S7578 | |
| anti cytokeratin 18 | Antibody | Abcam plc | ab668 | Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/100 in PBS |
| Anti E-cadherin | Antibody | Abcam plc | ab1416 | Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/50 in PBS. |
| Goat anti-albumin | Reagent | Bethyl Laboratories | E80-129 | Primary Ab, goat anti-human Albumin, used 1/200 in PBS |
| Rabbit anti-mouse IgG1 | Antibody | Invitrogen | A11059 | Secondary Ab, Alexa Flour 488 conjugated, used 1/100 in PBS + 0.5 % BSA |
| Cy3 anti-goat IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Lab | 705-165-003 | Cy3 AffiniPure donkey a-goat IgG Ab, used 1/700 in PBS + 0.5% BSA |
Referências
- Berry, M. N., Friend, D. S. High-yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells: A biochemical and fine structural study. J. Cell Biol. 53, 506-520 (1969).
- Seglen, P. O. Preparation of rat liver cells. 3. Enzymatic requirements for tissue dispersion. Exp. Cell Res. 82, 391-398 (1973).
- Giselbrecht, S., Gietzelt, T., Gottwald, E., Trautmann, C., Truckenmueller, R., Weibezahn, K. F., Welle, A. 3D tissue culture substrates produced by microthermoforming of pre-processed polymer films. Biomed. Microdev. 8, 191-199 (2006).
- Welle, A., Gottwald, E. UV-based patterning of polymeric substrates for cell culture applications. Biomed. Microdev. 4, 33-41 (2002).
- Gottwald, E., Giselbrecht, S., Augspurger, C., Lahni, B., Dambrowsky, N., Truckenmueller, R., Piotter, V., Gietzelt, T., Wendt, O., Pfleging, W., Welle, A., Rolletschek, A., Wobus, A. M., Weibezahn, K. -. F. A chip-based platform for the in vitro generation of tissues in three-dimensional organization. Lab Chip. 7, 777-785 (2007).
- Eschbach, E., Chatterjee, S. S., Noldner, M., Gottwald, E., Dertinger, H., Weibezahn, K. -. F., Knedlitschek, G., G, Microstructured scaffolds for liver tissue with high density: Morphological and biochemical characterization of tissue aggregates. J. Cell. Biochem. 95, 243-255 (2005).
