Descriviamo un chip basato su piattaforma per il tridimensionale coltura di cellule in micro-bioreattori. Un chip in grado di ospitare fino a 10 milioni. cellule che possono essere coltivate in condizioni ben definite in relazione al flusso del fluido, tensione ecc ossigeno in una sterile, la circolazione ad anello chiuso.
Abbiamo sviluppato un chip basato su sistema di coltura cellulare per la tridimensionalità coltivazione delle cellule. Il chip è tipicamente realizzati in polimeri non biodegradabili, per esempio, policarbonato o polimetilmetacrilato per stampaggio ad iniezione micro, micro caldo o goffratura micro termoformatura. Ma, può anche essere realizzati in polimeri biodegradabili. Le sue dimensioni sono 0,7 1 x 20 x 20 x 0,7 1 mm (AxPxL). Le principali caratteristiche del chip utilizzati sono sia una griglia di un massimo di 1156 mc micro-contenitori (cf-chip) ciascuno delle dimensioni di 120-300 x 300 x 300 μ (AxPxL) o recessi rotonda con diametro di 300 μ e una profondità di 300 μ (r-chip). L'impalcatura può ospitare 10 milioni. cellule in una configurazione tridimensionale. Per un ottimale dei nutrienti e gas, il chip è inserito in un alloggiamento bioreattore. Il bioreattore è parte di un circuito chiuso sterile circolazione che, nella configurazione più semplice, è additionaly composto da una pompa a rulli ed un serbatoio con una media di fornitura di gas. Il bioreattore può essere eseguito in perfusione, superfusione, o anche una modalità di funzionamento misto. Abbiamo coltivato con successo linee cellulari e cellule primarie per periodi di diverse settimane. Per le cellule di fegato di ratto primarie si potrebbe mostrare una conservazione delle funzioni del organotipica per più di 2 settimane. Per linee cellulari di carcinoma epatocellulare potremmo mostrare l'induzione di geni specifici del fegato o solo leggermente espresso in coltura monostrato standard. Il sistema potrebbe anche essere utile come sistema di cellule staminali dal esperimenti di coltivazione prima differenziazione di linee di cellule staminali sono promettenti.
Abbiamo sviluppato un chip basato su piattaforma per il tridimensionale coltura di cellule in bioreattori micro attivamente perfusi. I chip possono essere fabbricati da non biodegradabili e polimeri biodegradabili per stampaggio ad iniezione micro, goffratura a caldo ed micro tecniche di termoformatura 3. A seconda del disegno sperimentale, la superficie del polimero può essere modificato da irradiazione UV-4. Linee cellulari di epatociti così come epatociti primari di ratto può essere coltivata con successo in ques…
The authors have nothing to disclose.
Vorremmo ringraziare Mechthild Herschbach e Anke Dech per un'eccellente assistenza tecnica.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Cells | Outro | ATCC | HB-8065 | |
Collagen I from rat tail | Reagent | Roche Diagnostics | 11 179 179 001 | |
PARIS kit | Reagent | Ambion Inc. | AM1921 | |
Syto16 | Reagent | Invitrogen | S7578 | |
anti cytokeratin 18 | Antibody | Abcam plc | ab668 | Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/100 in PBS |
Anti E-cadherin | Antibody | Abcam plc | ab1416 | Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/50 in PBS. |
Goat anti-albumin | Reagent | Bethyl Laboratories | E80-129 | Primary Ab, goat anti-human Albumin, used 1/200 in PBS |
Rabbit anti-mouse IgG1 | Antibody | Invitrogen | A11059 | Secondary Ab, Alexa Flour 488 conjugated, used 1/100 in PBS + 0.5 % BSA |
Cy3 anti-goat IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Lab | 705-165-003 | Cy3 AffiniPure donkey a-goat IgG Ab, used 1/700 in PBS + 0.5% BSA |