Basato su chip tridimensionale coltura cellulare in perfuso Micro-bioreattori

Summary

Descriviamo un chip basato su piattaforma per il tridimensionale coltura di cellule in micro-bioreattori. Un chip in grado di ospitare fino a 10 milioni. cellule che possono essere coltivate in condizioni ben definite in relazione al flusso del fluido, tensione ecc ossigeno in una sterile, la circolazione ad anello chiuso.

Abstract

Abbiamo sviluppato un chip basato su sistema di coltura cellulare per la tridimensionalità coltivazione delle cellule. Il chip è tipicamente realizzati in polimeri non biodegradabili, per esempio, policarbonato o polimetilmetacrilato per stampaggio ad iniezione micro, micro caldo o goffratura micro termoformatura. Ma, può anche essere realizzati in polimeri biodegradabili. Le sue dimensioni sono 0,7 1 x 20 x 20 x 0,7 1 mm (AxPxL). Le principali caratteristiche del chip utilizzati sono sia una griglia di un massimo di 1156 mc micro-contenitori (cf-chip) ciascuno delle dimensioni di 120-300 x 300 x 300 μ (AxPxL) o recessi rotonda con diametro di 300 μ e una profondità di 300 μ (r-chip). L'impalcatura può ospitare 10 milioni. cellule in una configurazione tridimensionale. Per un ottimale dei nutrienti e gas, il chip è inserito in un alloggiamento bioreattore. Il bioreattore è parte di un circuito chiuso sterile circolazione che, nella configurazione più semplice, è additionaly composto da una pompa a rulli ed un serbatoio con una media di fornitura di gas. Il bioreattore può essere eseguito in perfusione, superfusione, o anche una modalità di funzionamento misto. Abbiamo coltivato con successo linee cellulari e cellule primarie per periodi di diverse settimane. Per le cellule di fegato di ratto primarie si potrebbe mostrare una conservazione delle funzioni del organotipica per più di 2 settimane. Per linee cellulari di carcinoma epatocellulare potremmo mostrare l'induzione di geni specifici del fegato o solo leggermente espresso in coltura monostrato standard. Il sistema potrebbe anche essere utile come sistema di cellule staminali dal esperimenti di coltivazione prima differenziazione di linee di cellule staminali sono promettenti.

Protocol

Questo articolo descrive l'utilizzo di un chip basato su piattaforma (fig. 1) per la tridimensionalità coltura di linee cellulari e cellule primarie. Dato che molte cellule fare esprimere le funzioni organotipica solo in un ambiente 3D, abbiamo sviluppato un chip polimero che fornisce una impalcatura a cui le cellule possono aderire in tutte le direzioni spaziali, e che può essere montato in un alloggiamento bioreattore per il controllo del flusso del fluido , la tensione di ossigeno ecc A seconda del disegno sper…

Discussion

Abbiamo sviluppato un chip basato su piattaforma per il tridimensionale coltura di cellule in bioreattori micro attivamente perfusi. I chip possono essere fabbricati da non biodegradabili e polimeri biodegradabili per stampaggio ad iniezione micro, goffratura a caldo ed micro tecniche di termoformatura ^3. A seconda del disegno sperimentale, la superficie del polimero può essere modificato da irradiazione ^UV-4. Linee cellulari di epatociti così come epatociti primari di ratto può essere coltivata con successo in ques…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Cells	Outro	ATCC	HB-8065
Collagen I from rat tail	Reagent	Roche Diagnostics	11 179 179 001
PARIS kit	Reagent	Ambion Inc.	AM1921
Syto16	Reagent	Invitrogen	S7578
anti cytokeratin 18	Antibody	Abcam plc	ab668	Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/100 in PBS
Anti E-cadherin	Antibody	Abcam plc	ab1416	Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/50 in PBS.
Goat anti-albumin	Reagent	Bethyl Laboratories	E80-129	Primary Ab, goat anti-human Albumin, used 1/200 in PBS
Rabbit anti-mouse IgG1	Antibody	Invitrogen	A11059	Secondary Ab, Alexa Flour 488 conjugated, used 1/100 in PBS + 0.5 % BSA
Cy3 anti-goat IgG	Reagent	Jackson ImmunoResearch Lab	705-165-003	Cy3 AffiniPure donkey a-goat IgG Ab, used 1/700 in PBS + 0.5% BSA