Perfused 마이크로 bioreactors의 칩 기반의 입체 세포 배양
Summary
우리는 마이크로 bioreactors에서 세포의 3 차원 배양을위한 칩 기반의 플랫폼을 설명합니다. 하나의 칩 10 미오 최대 집 수 있습니다. 멸균, 폐쇄 순환 루프에서 유체 흐름, 산소 장력 등에 관한 정확하게 정의된 조건 하에서 재배 세포 수 있습니다.
Abstract
우리는 세포의 3 차원 배양을위한 칩 기반의 세포 배양 시스템을 개발했습니다. 이 칩은 일반적으로 비 생분해성 고분자, 예를 들어, 폴리 카보 네이트 또는 마이크로 사출 성형에 의해 polymethyl 메타 크릴 레이트, 마이크로 핫 엠보싱 또는 thermoforming 마이크로에서 제조됩니다. 그러나, 그것은 또한 바이오 분해 고분자로부터 제조된 수 있습니다. 그 전체 크기는 0.7 일아르 X 20 X 20 X 0.7 1mm (hxwxl). 사용 칩의 주요 특징 중 하나 1,156 입방 마이크로 용기 (CF – 칩)을 최대 격자 각 120-300의 크기 X 300 X 300 μ (hxwxl) 또는 300 μ의 직경과 원형 recesses와 깊이 300 μ (R – 칩). 발판 10 미오를 집 수 있습니다. 3 차원 구성에 세포. 최적의 영양 및 가스 공급,이 칩은 생물 반응기의 주택에 삽입됩니다. 생물 반응기는 가장 간단한 구성에서, additionaly 롤러 펌프 및 가스 공급 중간 저수지 구성되어 있습니다, 폐쇄 steril 순환 루프의 일부입니다. 생물 반응기는 재관류, superfusion, 또는 혼합 작동 모드에서 실행할 수 있습니다. 우리는 성공적으로 몇 주간의 기간 동안 세포 라인뿐만 아니라 기본 세포를 재배했습니다. 쥐의 주 간 세포에 대한 우리는 이상의 2 주 동안 organotypic 기능의 보존을 보여줄 수 있어요. 간세포암 세포 라인을 위해하거나 약간 표준 monolayer 문화에서 표현하지 간 특정 유전자의 유도를 보여 수 있습니다. 줄기 세포 라인 첫번째 차별화 실험 이후 줄기 세포 배양 시스템은 유망 것처럼 또한이 시스템은 유용할 수 있습니다.
Protocol
Discussion
우리는 적극적으로 perfused bioreactors의 마이크로 세포의 3 차원 배양을위한 칩 기반 플랫폼을 개발했습니다. 칩은 마이크로 사출 성형, 핫 엠보싱뿐만 아니라 마이크로 thermoforming 기술 3 생분해성 고분자 비 생분해성에서뿐만 아니라 제작하실 수 있습니다. 실험 설계에 따라 고분자의 표면은 UV – 방사선 사에 의해 수정할 수 있습니다. 표현 몇 가지 간 특정 유전자의 분석뿐만 아니라 간 특정 단백?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 우수 기술 지원 Mechthild Herschbach 및 Anke Dech 감사하고 싶습니다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cells | Outro | ATCC | HB-8065 | |
| Collagen I from rat tail | Reagent | Roche Diagnostics | 11 179 179 001 | |
| PARIS kit | Reagent | Ambion Inc. | AM1921 | |
| Syto16 | Reagent | Invitrogen | S7578 | |
| anti cytokeratin 18 | Antibody | Abcam plc | ab668 | Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/100 in PBS |
| Anti E-cadherin | Antibody | Abcam plc | ab1416 | Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/50 in PBS. |
| Goat anti-albumin | Reagent | Bethyl Laboratories | E80-129 | Primary Ab, goat anti-human Albumin, used 1/200 in PBS |
| Rabbit anti-mouse IgG1 | Antibody | Invitrogen | A11059 | Secondary Ab, Alexa Flour 488 conjugated, used 1/100 in PBS + 0.5 % BSA |
| Cy3 anti-goat IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Lab | 705-165-003 | Cy3 AffiniPure donkey a-goat IgG Ab, used 1/700 in PBS + 0.5% BSA |
Referências
- Berry, M. N., Friend, D. S. High-yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells: A biochemical and fine structural study. J. Cell Biol. 53, 506-520 (1969).
- Seglen, P. O. Preparation of rat liver cells. 3. Enzymatic requirements for tissue dispersion. Exp. Cell Res. 82, 391-398 (1973).
- Giselbrecht, S., Gietzelt, T., Gottwald, E., Trautmann, C., Truckenmueller, R., Weibezahn, K. F., Welle, A. 3D tissue culture substrates produced by microthermoforming of pre-processed polymer films. Biomed. Microdev. 8, 191-199 (2006).
- Welle, A., Gottwald, E. UV-based patterning of polymeric substrates for cell culture applications. Biomed. Microdev. 4, 33-41 (2002).
- Gottwald, E., Giselbrecht, S., Augspurger, C., Lahni, B., Dambrowsky, N., Truckenmueller, R., Piotter, V., Gietzelt, T., Wendt, O., Pfleging, W., Welle, A., Rolletschek, A., Wobus, A. M., Weibezahn, K. -. F. A chip-based platform for the in vitro generation of tissues in three-dimensional organization. Lab Chip. 7, 777-785 (2007).
- Eschbach, E., Chatterjee, S. S., Noldner, M., Gottwald, E., Dertinger, H., Weibezahn, K. -. F., Knedlitschek, G., G, Microstructured scaffolds for liver tissue with high density: Morphological and biochemical characterization of tissue aggregates. J. Cell. Biochem. 95, 243-255 (2005).
