Summary
والهدف الرئيسي لهذه الدراسة هو لمعايرة واختبار طريقة تعمل بالهواء المضغوط (الهواء تجريد) جمع البيض في تراوت قوس قزح، وسمك السلمون المرقط براون. يسمح هذا الأسلوب فعالة وبسيطة بجمع البيض دون الحاجة إلى تدليك البطن الأسماك.
Abstract
جمع البيض أحد الإجراءات الأكثر أهمية خلال الاستنساخ الأسماك في المفرخات السلمونيات. الأساليب الكلاسيكية تنطوي على استخدام تدليك اليد على البطن الأسماك طرد البيض. أسلوب بديل يستخدم ضغط الغاز حقن في تجويف الجسم، مما يتسبب في إطلاق سراح اللاحقة من البيض. ويعتقد أن آثار أقل سلبية على نوعية الرعاية والبيض من الأمهات هذا الأسلوب. هنا، نحن مقارنة النتائج من الهواء وناحية تجريد الأساليب فيما يتعلق ببقاء سنة واحدة والبيض كمية ونوعية في اثنين من أسماك السلمون، تراوت قوس قزح (Oncorhynchus mykiss) وسمك السلمون المرقط البنى (Salmo trutta مورفى فريو). نتائجنا تشير إلى أن تجريد الجوية أسفرت عن نوعية أفضل من البيض وارتفاع معدل بقاء سنة واحدة في تراوت قوس قزح. وباﻹضافة إلى ذلك، تجريد الجوية أسفرت عن معدل وفيات أقل من الفريق تعرض لتجريد اليد (25% مقابل. 35%). وكان معدل الأس الهيدروجيني والفقس فريق اليد جردت أقل من تلك المجموعة الجوية جردت. في حالة سمك السلمون المرقط براون، كانت نوعية البيض التي حصل عليها من ناحية وأساليب تجريد الجوية مماثلة؛ ومع ذلك، الخسائر سنة واحدة في الأسماك كانت أعلى في الهواء جردت المجموعة (15% مقابل 0% في الأسماك اليد جردت). على الرغم من مزايا الهواء تجريد الأسلوب على اليد تجريد من حيث جودة البيض قد لا يراعي في جميع الأنواع السلمون، الإجراء تجريد الجوية قد يكون خياراً واعدة التي ستعتمد في المفرخات كما أنه يضمن مستوى عاليا من إمكانية تكرار نتائج والكفاءة.
Introduction
تراوت قوس قزح (Oncorhynchus mykiss) وسمك السلمون المرقط البنى (Salmo trutta مورفى فريو) تنتمي إلى عائلة سلمون سالمونيفورميس1. إنتاج هذين النوعين في الاستزراع المائي العالمي قد اكتسب النمو السريع، نظراً لأهميتها التجارية والترفيهية. في بولندا، وإنتاج أسماك السلمون يبلغ حوالي 000 20 طن، مع تراوت قوس قزح يجري الأنواع السائدة. من ناحية أخرى، يمثل سمك السلمون المرقط براون مصدرا رئيسيا لموارد أسماك المياه العذبة في أوروبا بسبب قيمته التجارية في تربية الأحياء المائية وأهمية بالنسبة للصيد الترفيهي. في كثير من النظم الإيكولوجية المائية، مهددة بوجود السكان تراوت براون. نتيجة لذلك طبق التكاثر الاصطناعي تقتني السكان المحليين من هذه الأنواع2.
المرقط وسمك السلمون المرقط براون بلوغ النضج الجنسي عادة في سن الثالثة، مع الذكور الناضجة سنة أقدم من الإناث1. تحت ظروف مصطنعة، يتم عادة جمع البيض والحيوانات المنوية المرقط وسمك السلمون المرقط براون قبل تدليك البطن لطيف. في الممارسة العملية، على نطاق صغير، أسلوب تجريد اليد لجمع البيض فعالة من حيث التكلفة. ومع ذلك، على نطاق واسع، قد يكون أسلوب تجريد اليد كثيفة العمالة ومرهقة. كنتيجة لذلك، يمكن أن يؤدي هذا الأسلوب كسر البيض بسبب تعب العمال التفريخ. كسر بيض غالباً ما يؤدي إلى انخفاض الرقم الهيدروجيني للسائل المبيض والإفراج عن صفار البيض، التي تؤثر سلبا على إخصاب البيض3. وعلاوة على ذلك، قد يؤدي هذا الأسلوب التقليدي لجمع البيض (الضغط مرارا وتكرارا من البطن) أيضا في وفيات الأمهات الناجمة عن العدوى الجلدية المرتبطة بتدهور حاجز وقائي من المخاط.
واستخدمت أسلوب هوائي لجمع البيض أولاً في أستراليا في عام 19574. يستند الأسلوب حقن الغازات (الهواء أو النيتروجين أو الأكسجين) في تجويف الجسم طرد البيض باستخدام ضغط الغاز. هذه التقنية سهلة وسريعة قد طبقت بنجاح في أسماك السلمون دون أي آثار جانبية سلبية على الأسماك4. في الآونة الأخيرة، استخدمت هذا الأسلوب في الأنواع البرية (الشمالية بايك، لوسيوس Esox) لجمع البويضات الناضجة في ظروف اصطناعية5. وقد تبين أن الهواء جردت البيض كان أعلى من الإخصاب والفقس المعدلات مقارنة باليد جردت البيض، بغض النظر عن الحل المستخدم للاخصاب (حل وويناروفيتش، بليارد المياه العازلة أو التفريخ)5.
وكان الهدف الرئيسي لهذه الدراسة لاختبار طريقة تعمل بالهواء المضغوط (الهواء تجريد) جمع البيض في تراوت قوس قزح، وسمك السلمون المرقط براون بالمقارنة مع التقليدية من ناحية تجريد الأسلوب. وقورنت الكفاءة لكلتا الطريقتين (حجم البيض التي تم الحصول عليها) ووقت لجمع، ونوعية من الأمشاج (pH السائل المبيض)، فضلا عن التفريخ وبعد تفريخ وفيات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وأجريت إجراءات وفقا "اللجنة المحلية" "أخلاقيات التجارب الحيوانية" في اولشتين، بولندا.
1. إعداد المعدات
- استخدام المحاقن والإبر لحقن الغاز في تجويف جسم الأسماك.
- تعيين ضغط الغاز في 0.5 بار، والإبقاء على هذا الضغط يكون أقل من 1 بار في جميع أنحاء.
- التحكم في تدفق الهواء. لأسماك السلمون، هو 1.5 لتر في الدقيقة سرعة استنفاد الغاز الأكثر كفاءة. الحفاظ على سرعة الأمثل نظراً لسرعة أعلى قد لا يحصل على كل البيض بينما سرعة أبطأ دون داع قد تطيل الإجراء.
- الاتصال حقنه بإبرة مشدود (0.8-1.2 مم) لتجنب مفرزة إبرة الناجم عن ضغط الغاز.
2-الشحن الجوي التفريخ
- تخدير الأسماك بنسبة 0.2 في المائة بروبيسسين. ضع الأسماك في حمام مائي مع 0.2% بروبيسسين وانتظر حتى يصبح السمك لا يستجيب.
- تجف بعناية قبل التفريخ بمسحه بقطعة قماش قطنية جافة.
- ضع السمك في السرير مائل عن 35-40 درجة، في أسفل الذيل لها جنبا إلى جنب. مع دفع لطيف للبطن الأسماك، تحقق من تدفق البيض من السبيل التناسلي. إذا لم تكن موجودة البيض، وينبغي أن لا تكون ولدت الأسماك.
- ضع حاوية مغطاة بشبكة أدناه الحليمة الأسماك لجمع البيض.
- إدراج الإبرة أدناه زعانف البطن بسرعة.
- بحرية إزالة البيض من الغاز حتى تتم إزالة فقط المفرد البيض من جسم الأسماك.
- بلطف تدليك البطن لإزالة الغاز الزائد من جسم الأسماك.
- بعد التفريخ، بلطف نقل الأسماك إلى خزان مع تدفق المياه. الأسماك صدر للدبابات بعد تفريخ الهواء قد تسبح في البداية على سطح الماء. بعد عدة دقائق الأسماك تصدر الغاز المتبقي أثناء السباحة، ويبدأ في السباحة عادة.
ملاحظة: البيض التي تم الحصول عليها جداً نظيفة وخالية من التلوث بالدم أو البراز.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
وتم الحصول على ناضجة الذكور والإناث من تراوت قوس قزح (العمر + 2، 1700 ± غ 328) وسمك السلمون المرقط براون (العمر + 3، 1900 ± ز 435) من "تفريخ أسماك السلمون" (من روتكي-Żukowo، الداخلية مصايد الأسماك المعهد في اولشتين، بولندا). ووضعت في خزانات منفصلة بحجم حوالي 5 م3الذكور والإناث. درجة حرارة الماء كان 12±1 درجة مئوية. قبل التلاعب، تم تخديره من الأسماك بنسبة 0.2 في المائة بروبيسسين. تم تقسيم الأسماك إلى مجموعتين. وخضع جزء منها طريقة تقليدية للحصول على البيض، أي ضغط البطن (n = 20). المجموعات المتبقية وخضع الإجراء هوائي باستخدام الهواء (n = 20). البيض من كل أنثى جمعت كل على حدة ووضعها في أوعية بلاستيكية جافة.
خلال تجريد البيض من ناحية، كان مسحت الأسماك أولاً بقطعة قماش جافة أثناء الضغط بالأسماك على جنبها، الذيل. وتم قياس مدة التفريخ بدءاً من نقطة حيث يحمل المشغل السمك وأما، بدء الضغط على البطن أو حقن الإبرة. تم تعيين نقطة نهاية الوقت عند توقف البيض تتدفق إلى الوعاء. لجهة تجريد، واختير أحد العمال المهرة إجراء التجربة كلها، والهواء الداخلي تجريد نفذه العمال المهرة آخر.
أثناء الإجراء، تم قياس حجم البيض التي تم الحصول عليها باستخدام اسطوانة قياس والسائل المبيض تم تجميعها بشكل منفصل من كل عينة الإناث. بعد ذلك، وقد تم تحليل مستوى الرقم الهيدروجيني استخدام قطب درجة حموضة. واتسمت أمهات الأسماك المستخدمة في تجاربنا مع العلامات باقة متكاملة السلبي (الحفرة). علامات يسمح لنا أن نلاحظ أن معدل الوفيات في كل مجموعة من الأسماك.
فورا بعد جمع، تعرض كل عينة للاخصاب. تضعف الحيوانات المنوية للاخصاب تم جمعها حول قبل 10 دقائق للتفريخ وتخزينها في موريساوا الحل6 (0.1 M كلوريد الصوديوم، 0.04 م بوكل، 0.003 م كاكل2، 0.0015 م MgCl2 x 6 ح2س، 0.05 M تريس، الأس الهيدروجيني 8.5)، بنسبة 1:9 في 4 درجات مئوية. تم استخدام الخليط من الحيوانات المنوية التي تم الحصول عليها من أربعة المرقط أو سمك السلمون المرقط براون الذكور على التوالي.
نظراً لمعدل الفقس هو أنسب مقياس لجودة البيض، البيض المرقط وسمك السلمون المرقط البنى التي تم الحصول عليها من جهة وأساليب تجريد هوائي تعرضوا للاخصاب. تم إخصاب البيض مع الحيوانات المنوية حوالي 100,000 كل بيضة، استخدام البيض حوالي 100 من كل أنثى ولدت. تم قياس تركيزات الحيوانات المنوية في قاعة Bürker بعد حلول الحيوانات المنوية المخفف 1:2000 بنسبة 0.7 في المائة كلوريد الصوديوم. تم إخصاب البيض مع الحيوانات المنوية في 5 مل الحل بليارد (0.125 M كلوريد الصوديوم، 0.002 M تريس العازلة، جليكاين 0.003 متر، ومم 0.001 كاكل2، pH 9.0) لكل متغير7. وأجريت تكرار اثنين لكل عينة من البيض. ثلاث دقائق بعد الإخصاب، عينات البيض تم غسلها بعناية مرتين في الماء التفريخ. ثم وضعت البيض في شبكة خاصة، ووضع كل متغير تجريبي بشكل منفصل. ووضعت البيض المخصب في حضانات في 8 درجات مئوية وتم تحديد عدد البيض العينين حوالي أربعة أسابيع في وقت لاحق. النسبة المئوية لبيض الفقس كما تقرر وفقا للصيغة: (البيض التي كانت المخصبة x 100%)/(جميع البيض في المتغير ملموسة).
تم تحديد الاختلافات بين علاجات تجريبية مع إقران تي-اختبارات مستوى من أهمية ف < 0.05. تم تحويل البيانات كنسبة مئوية استخدام تحويل قوس-الخطيئة قبل التحليل الإحصائي. وأجريت التحليلات الإحصائية مع البرنامج "المنشور جرافباد".
وكانت أقصر مدة جمع البيض باليد تجريد أسلوب (حوالي 10 س) بالمقارنة مع الهواء تجريد الأسلوب في كلا من الأنواع (الشكل 1؛ ف < 0.05). أساليب تجريد (التقليدية أو هوائي) لم يكن لها تأثير على حجم البيض التي تم الحصول عليها من الإناث المرقط وسمك السلمون المرقط براون (الشكل 2). حموضة السائل المبيض في تراوت قوس قزح بعد تجريد اليد كان 7.6، بينما في الهواء تجريد الأسلوب، زادت درجة الحموضة إلى 8.0 (الشكل 3؛ ف < 0.05). ومع ذلك، بغض النظر عن أساليب جمع البيض، pH السائل المبيض في تراوت براون لم تتأثر (الشكل 2). وكان معدل الفقس في تراوت قوس قزح، أعلى بكثير (الشكل 4؛ ف < 0.05) في البيض جردت الهواء مما في تجريده من ناحية البيض. وكان نسبة وفيات أعلى بعد تجريد بالمقارنة مع الهواء تجريد في تراوت قوس قزح من ناحية. بيد في تراوت براون، كانت نسبة وفيات أعلى (15 في المائة) في الهواء جردت البيض من تجريده من ناحية البيض (الجدول 1).
الشكل 1 . الوقت لتجريد بعد التقليدية (تجريد اليد) والهوائية (تجريد الهواء) طريقة لجمع البيض في تراوت قوس قزح، وسمك السلمون المرقط براون. تتم الإشارة إلى دلالة إحصائية بالعلامات النجمية تمثل قيمة P (* * * ف < 0.001)، أشرطة الخطأ تشير إلى SD (n = 20). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 . حجم البيض التي تم الحصول عليها بعد التقليدية (تجريد اليد) وتعمل بالهواء المضغوط (الهواء تجريد) طرق جمع البيض في تراوت قوس قزح، وسمك السلمون المرقط براون. أشرطة الخطأ تشير إلى SD (n = 20). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 . PH السائل المبيض بعد التقليدية (تجريد اليد) وتعمل بالهواء المضغوط (الهواء تجريد) طرق جمع البيض في تراوت قوس قزح، وسمك السلمون المرقط براون. تتم الإشارة إلى دلالة إحصائية بالعلامات النجمية تمثل قيمة P (* * * ف < 0.001)، أشرطة الخطأ تشير إلى SD (n = 20). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 . النسبة المئوية لمعدل الفقس بعد التقليدية (تجريد اليد) وتعمل بالهواء المضغوط (الهواء تجريد) طرق جمع البيض في تراوت قوس قزح، وسمك السلمون المرقط براون. تتم الإشارة إلى دلالة إحصائية بالعلامات النجمية تمثل قيمة P (* * ف < 0.01).، أشرطة الخطأ تشير إلى SD (n = 20). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
| الأنواع | طريقة جمع البيض | |
| تجريد اليد | الهواء تجريد | |
| تراوت قوس قزح | 35 | 25 |
| سمك السلمون المرقط براون | 0 | 15 |
الجدول 1. النسبة المئوية للوفيات بعد التفريخ بعد التقليدية (تجريد اليد) والهوائية (تجريد الهواء) طرق جمع البيض في تراوت قوس قزح وتراوت براون مقاسا أكثر من سنة واحدة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
الأسلوب هوائي لجمع البيض من الأسماك، على الرغم من أن تستغرق وقتاً طويلاً أكثر من الطريقة التقليدية (تجريد) من جهة، ويمكن تأمين جودة عالية من بويضات نضجت (هذا العمل). وهذا يرتبط بانخفاض خطر تعطل الميكانيكية للبيض أثناء تطبيق هذا الإجراء. درجة الحموضة العالية من السائل المبيض، فضلا عن زيادة في معدل الإخصاب، تشهد على مدى فائدة هذه الطريقة تعمل بالهواء المضغوط. عموما، يمكن أن يكون الهواء تجريد أسلوب جمع البيض في الاستنساخ الأسماك خيار واعدة من حيث توحيد البروتوكولات التفريخ، وكما تطبيقها بنجاح لا تتصل بالتميز اليدوي من المشغلين.
على الرغم من أن التبويض الهواء ويبدو أن خيار تلقائي، وجدنا أنه قد يستغرق وقتاً أطول من البيض اليدوي. يمكن أن يكون هذا الاختلاف في مدة واضحة خاصة عندما العمال ذوي التفريخ بتطبيق إجراءات تجريد اليد. ومع ذلك، فإنه ينبغي أن يشار إلى أن مدة التفريخ بالاستخدام الهواء الضغط لا يزال مرض؛ حوالي 20 ثانية لكل الأسماك. وعلاوة على ذلك، فعالية هذا الأسلوب لا يعتمد على خبرة العمال، كما الحال مع جهة تجريد الأسلوب.
على الرغم من أننا لم تلاحظ أية اختلافات بين كميات من البيض التي تم الحصول عليها، والاختلافات في درجة حموضة السائل المبيض كانت واضحة في حالة تراوت قوس قزح. هذا التأثير على الأرجح تتعلق بكسر البيض، حسب درجة الحموضة مؤشر جيد لهذه الظاهرة3. البيض المخصبة أكثر عرضه للإصابات الميكانيكية وعلى زيادة مقاومة بعد تنشيط البيض أثناء تصلب الساعة8. البيض المكسور المخصبة المسؤولة عن انخفاض معدلات التسميد في السلمون وكما ذكرت في مكان آخر. ولذلك، يجب اتخاذ العناية القصوى أثناء جمع البيض. البيانات المتوفرة لدينا تشير إلى أن البيض المخصبة تراوت قوس قزح أضعف من بيض سمك السلمون المرقط براون. كان البيض المرقط جمعتها من ناحية تجريد أقل درجة الحموضة والفقس معدل مقارنة بتلك التي تم الحصول عليها بتجريد الهواء. هذا ولم ينظر في حالة سمك السلمون المرقط براون. لدينا تجارب تشير إلى أن عملية تجريد الهواء للأنواع السلمون مع البيض أكثر ليونة، قد يكون من المفيد فيما يتعلق بمرحلة ما بعد التبويض نوعية.
دائماً مرئياً الفردية وفيات الأمهات بعد التفريخ في أسماك السلمون المفرخات. ومع ذلك، الحدوث تتصل حالة فردية والحالة الصحية للأسماك. تجريد الهواء ويبدو أن أسلوب معتدل لجمع البيض كما كان هناك لا خسائر فادحة في مخاط الجلد، عقبة هامة ضد العوامل الممرضة من الماء. وعلى الرغم من حقيقة أن نحن لم يلاحظ أي وفيات ما بعد التفريخ (في غضون شهر واحد من البيض)، أظهرت المراقبة العام كله يفقد بعض الأسماك. في حالة تراوت قوس قزح، لاحظنا جردت حوالي 10% أعلى الخسائر في يد المجموعة، حين، التراوت البنى، تجريد الجوية أدى في وفيات 15% على مدار السنة. يمكننا أن نفترض أن تجريد الهواء يمكن أن يكون أكثر فائدة تراوت قوس قزح من سمك السلمون المرقط براون من حيث جودة البيض والوفيات الإجمالية للأمهات.
على الرغم من أن تجريد الهواء مفيد للبيض المرقط، لكن ليس لسمك السلمون المرقط براون، فإننا نقترح أن هذا الإجراء قد يكون أكثر موحدة مقارنة لجهة إجراء تجريد. في الهواء تجريد، الضغوط التي مورست في البطن من الأسماك هو العامل الوحيد الذي يؤثر على نوعية وكمية من بويضات نضجت الحصول عليها. استخدام هذا الأسلوب في المفرخات يخفف خسائر بيض سمك السلمون، والتي تحدث أساسا نتيجة لكسر البيض11. منذ لا مهارات خاصة مطلوبة للقيام بتجريد الهواء الداخلي، ونحن نتوقع أن يمكن الحصول على نفس كمية ونوعية البيض العمال التفريخ المهرة وغير المهرة على حد سواء. نحن نوصي بتجريد الهواء الداخلي كخيار وأعد المفرخات جديدة تسعى لإجراءات جمع البيض تتميز بمستوى عال من الكفاءة وإمكانية تكرار نتائج، فضلا عن قليلاً أو لا تواجه المشغلين.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
وأيده الدراسة قدم المشروع "أسلوب هوائي لتجريد الأسماك-ممكنة التطبيق، تأثير على نوعية الأمشاج والكمية ورعاية الأسماك" (المختصر: بنيوفيش) الممولة في إطار "التنفيذية برنامج التنمية مصايد الأسماك القطاع والمناطق الساحلية 2007-2013 "(أو-61724-OR1400001/10)، الأموال التي خصصت للمعهد من استنساخ الحيوانات والبحوث الغذائية البولندية أكاديمية العلوم، اولشتين، بولندا، ودعم مكتب التكلفة (الأغذية والزراعة تكلفة العمل FA1205: أقواجاميتي ). نود أن نشكر، ستانلي مجدي فوزي لدعم كبير في تحرير اللغة الإنجليزية. نحن نريد أن نسلم أيضا منتجي الرسوم المتحركة "ستوديو فيلمووي روشم أوبرازكي".
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glycine pure P.A. | AVANTOR | 527560117 | sperm activating buffer |
| Trizma base | Sigma Aldrich | T1503 | sperm activating buffer |
| Sodium chloride Bioreagent | Sigma Aldrich | S5886 | sperm activating buffer |
| Calcium chloride anhydrous | Sigma Aldrich | C4901 | sperm activating buffer |
| Propiscin (0.2% etomidate solution) | IRS Olsztyn, Poland | not indicated | |
| compressor | Thomas Sheboigan WI USA | DT/SR 070800001882 | |
| reduction valve | Camozzi | cRJUS U7J | |
| air hose | ZEC T.P.U. | SH.98 | |
| syrgine | EFD | 7012118 | |
| Air spawning stage | Biopasz, Poland | PNEU001 | |
| Orion Ross Ultra electrode | Thermo Scientific, Waltham, MA, USA | 8102BNUWP |
References
- Nelson, J. S. Fishes of the World. , 4th, JohnWiley and Sons, Inc. Hoboken, NJ, USA. (2006).
- García-Marín, J. L., Sanz, N., Pla, C. Proportions of native and introduced brown trout in adjacent fished and unfished Spanish rivers. Conservation Biology. 12, 313-319 (1998).
- Dietrich, G. J., Wojtczak, M., Slowinska, M., Dobosz, S., Kuzminski, H., Ciereszko, A. Broken eggs decrease pH of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) ovarian fluid. Aquaculture. 273, 748-751 (2007).
- Zurbuch, P. E. A structure for easy fish recovery during drainage of an impoundment. Progressive FishCulturist. 27, 237-238 (1965).
- Cejko, B. I., et al. Effects of different stripping methods of female and activation medium on fertilization success in northern pike (Esox lucius). Czech Journal of Animal Sciences. 10, 481-486 (2016).
- Morisawa, S., Morisawa, M. Induction of potential for sperm motility by bicarbonate and pH in rainbow trout and chum salmon. Journal of Experimental Biology. 136, 13-22 (1988).
- Billard, R., Cosson, J., Perchec, G., Linhart, O. Biology of sperm and artificial reproduction in carp. Aquaculture. 129, 95-112 (1995).
- Iuchi, I., Ha, C. R., Sugiyama, H., Nomura, K. Analysis of chorion hardening of eggs of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss. Development Growth and Differentiation. 38, 299-306 (1996).
- Wojtczak, M. A., Kowalski, R. K., Dobosz, S., Goryczko, K., Kuźminski, H., Glogowski, J., Ciereszko, A. Assessment of water turbidity for evaluation of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) egg quality. Aquaculture. 242, 617-624 (2004).
- Tabrizi, E. N., Khara, H., Nezami, S. A., Lorestani, R., Shamspour, S. Broken Eggs Influence on Fertilization Capacity and Viability of Eggs, Turbidity and pH of Ovarian Fluid and Fertilization Water in the Endangered Caspian Brown Trout, Salmo Trutta Caspius. International Journal of Biology. 3 (1), 161-166 (2011).
- Carl, G. C. Beware of the broken egg! A possible cause of heavy losses of salmon eggs. Progresive Fish-Culturist. 53, 30-31 (1941).
