마우스에 Omentum 작은 섬 이식 하는 방법
Summary
마우스에 독도의 omental 이식 하는 방법을 소개 합니다. 격리 된 독도 히드로와 혼합 하 고 혼합 당뇨 마우스의 omental 주머니에 배치 됩니다. 그리고, 혈액 포도 당 감시 면역 조직화 학적인 분석을 수행 합니다.
Abstract
타입-1 당뇨병에 대 한 잠재적인 치료를 작은 섬 이식 제안 되었습니다. 최근 강력한 증거 나타냅니다 혈관 내 섬 주입 이상 까지입니다 이며 따라서는 omentum 섬 이식에 대 한 잠재적으로 가치 있는 사이트로 다시 신흥. 이 실험에는 고품질 독도의 고립과 당뇨병 받는 사람에 게 독도의 주입 필요합니다. omentum에 이식 수술 단계를 더 시각적으로 설명 될 수 있다 필요 합니다. 여기,이 절차에 대 한 자세한 내용은 표시 됩니다. 당뇨병 쥐의 omental 주머니에 혼합물을 배치 하기 전에 히드로와 격리 된 독도 혼합의 두 가지 방법은 여기 설명 되어 있습니다. 다른 hydrogels 다른 조건을 위해 사용 됩니다. Syngeneic 독도 omentum에서 받는 사람 당뇨 마우스의 혈당은 최대 35 일 동안 감시 되었다. 일부 동물 면역 조직화 학적인 분석을 수행 하기 위해 14 일 후에 희생 되었다. 전 임상 이식 이렇게 예비 데이터 임상 이식에 번역을 사용할 수 있습니다.
Introduction
국제 당뇨병 연맹 (IDF)에 따르면 당뇨병 mellitus 현재 382 백만 사람들, 20351592 백만 명 예상된 증가 함께 적용 됩니다. 두 수용자와 xenogeneic 섬 이식 조직 면역 치료가 필요 합니다. 면역 억제, 없이 면역 거부 이식 손실2의 주요 원인입니다. 또한 중재 인스턴트 혈액 염증 반응 (IBMIR)3,4인 이식된 섬 손실의 중요 한 문제가입니다. 그러나, syngeneic와 같은 면역 반응의 부재에도 자동 이식 모델, 작은 섬 세포는 문맥을 통해 간으로 이식 가난한 혈액 등 불리 한 환경 조건, 또는 염증 때문에 손실 됩니다 또는 공급 감소 산소 및 영양소5,6. 그 결과, 장기 신진 대사 기능을 보장 하기 위해 높은 섬 번호는 감소 engraftment7초기 세포 손실을 보상 하는 데 필요한.
섬 engraftment를 최적화 하기 위해 시도, 여러 대체 해 부 사이트 실험적으로 조사 뿐 아니라 임상, 약속, 아직 하지 확실 한 결과8. 대체 사이트 중 일부는 간단 하 고 안전한 액세스를 제공 하는 반면 (예., 피부, 신장 캡슐, 위 submucosa 및 눈의 앞쪽 챔버) 또는 더 큰 섬 대 중을 위한 더 넓은 표면 (예., 복 막 구멍), 생존 및 생리 신진 대사 이식된 독도의 제한는 성능과 우려9유지. 섬 engraftment에 대 한 더 적합 한 사이트에 대 한 검색 진행 중 이다.
omentum 많은 해 부 사이트를 작은 섬 이식의 초기 개발에 조사 하 고 독도10,,1112,13, 성공적인 환경 입증 했다 중 하나 였습니다. 14. 그러나, intraportal 섬 주입 임상 선택 인해 일부 절차의 상대적 단순 되었고 동물에 이른 성공 모델6. 또한, 부분적으로, 원판이 관련 사이트, 특히 대규모 초기 섬 손실, 덜 이해 하 고 덜 제한 필드 실험 섬 이식의 초기 시절에 했다 성숙. 최근 강력한 증거를 나타내는 혈관 내 섬 주입에서 멀리 이상적는 omentum은 세포 이식에 대 한 잠재적으로 가치 있는 사이트로 다시 신흥.
(Omental 주머니의 형태로) omentum 간15,16상대적 이점을 제공합니다. 그것은 쉽게 접근할 수 있는 잘 vascularized입니다. 이식 (필요한 경우) 생 검의 검색 수 있습니다. 독도 의해 경험 하는 허 혈 성 기간 간에 비해 감소 하 고 있는 omentum 불가능 intraportally, 어디 포털 압력에서 상승 큰 섬 대 중 합병증을 일으킬 수 있습니다 상대적으로 받아들일 수 있다.
이식의 syngeneic 마우스 모델 연구, 고용 6-8 주 몸 무게의 20-25 g. 섬 받는 250의 복용량 streptozotocin의 단일 주사와 당뇨병 렌더링 했다와 오래 된 사이 남성 마우스 C57BL/6에서에서 테스트 프로토콜에 사용 된 mg/kg ip입니다. 당뇨병의 유도 경우 마우스의 혈액 포도 당 수준 24 mmol/L 48 h 보다 큰 주입 후 최소 5 일에 대 한 해당 수준의 위 남아 성공적인 간주 될 수 있습니다.
Syngeneic 독도 일부 수정 이전 게시 된 방법에 따라 나이 일치 하는 기증자의 췌 장 으로부터 격리 했다. 간단히는 콜라 대신 담 관 담 낭에 주입 했다. 이 주입의 용이성을 촉진 하기 위하여 개선으로 이루어졌다. 콜라 주입이 했다 뒤에 부 화, 조직 파괴, 밀도 그라데이션 분리 및 순수 독도를 손으로 따기. 독도 아래 10% 열 비활성화 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 37 ° C에서 플라스 크 T175에에서 보충 하는 CMRL-1066 매체에서 하룻밤 배양 했다 이식 전에 95% 공기-5% CO2 .
Protocol
Representative Results
Discussion
문맥을 통해 간 섬 이식 가장 일반적으로 사용 되는 작은 섬 이식의 방법 인간, 하지만 여전히 포털 정 맥 혈전 증과 간 steatosis17등 효율성과 안전 문제입니다. 최근 연구는 omentum 간, 하지만 더 많은 연구 필요 임상 번역12,14,,1819전에 실시 해야 적당 한 대안이 있을 수 있습니다 보여?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품의 저자 중 일부 국가 키 R & D 중국 프로그램 (2017YFC1103704), 심천 (SZSM201412020), 높은 수준의 의료 분야 건설의 심천 (2016031638)에 대 한 기금에서에서 의학의 인민 프로젝트에서 교부 금에 의해 부분적으로 지원 되었다 심천 과학 및 기술 (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425110110658), 보건 및 가족 계획 위원회 (SZXJ2017021)의 심천 기초의 기초.
Materials
| Equipment | |||
| 5 inch (12-13 cm) Scissors | RWD Life Science | S12030-11 | |
| Fine Forceps | RWD Life Science | F11010-13 | |
| Small wound clips | RWD Life Science | R33003-01 | |
| Acutenaculum | RWD Life Science | F31044-13 | |
| 2 pair tissue forceps | RWD Life Science | F13023-10 | |
| 4-0 Suture with needle | Chenghe, China | 17094 | |
| 200μl Pipette and tips | Gilson | PN11 | |
| One Touch ultraeasy Basic blood glucose monitoring system | Johnson & Johnson | 33391713 | |
| razor blade | Philips | HC1099/15 | |
| Material and animals | |||
| Pentobarbital Sodium | Sigmaaldrich.com | P3761 | For anesthesia |
| Hydrogel | bdbiosciences.com | 356234 | Basement Membrane Matrix |
| Fibrin-Thrombin Hydrogel | Baxter.com | 1501250 | Components clot when mixed |
| 70% Ethanol | Yingniu medical, Anhui, China | 23170608 | |
| Iodophor | Lierkang medical technology, Shangdong, China | 170521 | |
| Normal saline | Baxter.com | 2B1324 | |
| Cephalosporin | Lukang medical, Shangdong, China | 150303 | |
| Cefazolin | Baxter.com | 2G3508 | |
| lubricant eye ointment | Major Pharmaceuticals | 203964 | |
| streptozotocin | Sigmaaldrich.com | S0130 | |
| collagenase Type V | Sigmaaldrich.com | C9262 | |
| CMRL-1066 media | celltrans, Wenzhou, China | X018D1 | |
| histopaque | Sigmaaldrich.com | 10771 | density gradient |
| PE50 tubing | Braintreesci.com | PE50 100 FT | Polyethylene .023" x .038 |
| Calcein AM | Sigmaaldrich.com | C1359 | |
| Propidium iodide | Sigmaaldrich.com | P4864 | |
| optimal cutting temperature compound (OCT) | Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL | 4583 | embedding medium |
| insulin antibody | Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923 | 8138S | |
| hematoxylin staining media | Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923 | 14166S | |
| eosin staining media | Beyotime Biotech, China | C0109 | |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific Inc. | D1306 | |
| C57Bl/6 Mice | Medical Animal Center of Guangdong Province | / | |
| Fetal Bovine Serum | GE Healthcare Life Sciences | SH30084 | |
| T175 flasks | Falcon | 353112 | |
| 1.5mL Snap-top tubes | Axygen | MCT-150-C |
Referências
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