Un modèle de glaucome induit par la Suture Circumlimbal chez le rat et la souris
Summary
Hypertension oculaire chronique est induite en appliquant une suture de circumlimbal chez les rats et les souris, conduisant à une détérioration fonctionnelle et structurelle des cellules ganglionnaires rétiniennes conformes de glaucome.
Abstract
La suture de circumlimbal est une technique permettant d’induire expérimental glaucome chez les rongeurs en élevant chroniquement la pression intraoculaire (PIO), un facteur de risque connu de glaucome. Ce protocole montre un guide étape par étape sur cette technique en Long Evans rats et les souris C57BL/6. Sous anesthésie générale, une « » suture en bourse est appliquée sur la conjonctive, autour de l’Équateur et derrière le limbe de le œil. Le œil collègue sert un témoin non traité. Pendant toute la durée de notre étude, qui a été une période de 8 semaines pour les rats et 12 semaines pour les souris, le IOP est demeurée élevée, mesurée régulièrement par tonométrie de rebond chez des animaux conscients sans anesthésie topique. Chez les deux espèces, les yeux suturées a montré électrorétinogramme fonctionnalités compatibles avec dysfonctionnement rétinien intérieur préférentiel. Tomographie par cohérence optique a montré sélectif amincissement de la couche des fibres nerveuses rétiniennes. Histologie de la rétine de rat en coupe transversale trouvé réduit la densité des cellules dans la couche de cellules ganglionnaires, mais aucun changement dans les autres couches cellulaires. La coloration des rétines souris plat monté avec un marqueur spécifique de la cellule de ganglion (RBPMS), a confirmé la perte de cellules ganglionnaires. La suture de circumlimbal est un simple, minimalement invasive et économique moyen d’induire l’hypertension oculaire qui conduit à des lésions des cellules ganglionnaires chez les rats et les souris.
Introduction
Modèles animaux fournissent qu’une plate-forme importante pour l’étude de systèmes cellulaires en laboratoire processus sous-jacent pathogenèse de glaucome, ainsi que d’évaluer les interventions thérapeutiques possibles. Plusieurs modèles inductibles ont été développés pour produire l’élévation soutenue de la pression intraoculaire (PIO), le plus important facteur de risque de glaucome. Les méthodes qui ont été appliqués pour élever IOP comprennent : une injection saline hypertonique dans épiscléral1, photocoagulation laser du trabéculum2 ou des veines limbique3et intracameral injection de substances telles que les veines fantôme rouge globules4, microbilles5,6 et viscoélastique agents7. Chaque approche a ses avantages et ses limites.
Un bon modèle pour le glaucome devrait imiter le processus de la maladie, avec complication minime comme des opacités traumatisme, inflammation et médias. Ces complications sont souvent associées avec les procédures utilisées pour induire l’élévation des IOP et peuvent confondre interprétation des résultats. Par exemple, ponction de la chambre antérieure, même lorsque les substances étrangères ne sont pas introduites, s’est avérée causer un traumatisme et une inflammation qui n’est pas représentative du changement glaucomateuse typique8,9. En plus de l’importance d’éviter l’inflammation, maintenant clarté optique facilite l’imagerie in vivo et électrophysiologie pour surveiller la progression de la maladie. Même si on ne sait pas dans quelle mesure ces complications peuvent affecter les enquêtes de la maladie, il peut être préférable d’éviter de pénétrer dans le œil durant l’induction modèle. L’approche de suture circumlimbal évite la pénétration du globe et facilite en vivo une évaluation longitudinale de structure rétinienne et la fonction. Plus important encore, ce modèle diffère des précédents dans sa capacité à retourner IOP aux valeurs de base par l’enlèvement de la suture au besoin. Normalisation de l’IOP peut-être être utile pour étudier le cellulaire et moléculaires corrélats du ganglion réversible et irréversible cellulaire blessure10,11,12,13,14.
Cet article se concentre sur la technique d’induction de modèle. Caractérisation de la lésion rétinienne induite par ce modèle chez les rats et les souris se trouvent plus en détail ailleurs15,16,17,18,19.
Protocol
Representative Results
Discussion
La suture de circumlimbal est un nouveau modèle d’hypertension oculaire chronique. Outre les études dont les résultats représentatifs sont d’origine16,18, ce modèle animal a été utilisé dans un certain nombre de récentes études15,23,24,25 ,26. Comparaison entre ces rapports précédents …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail est financé par la National Health et subvention de projet du Medical Research Council of Australia (1046203), Australian Research Council avenir Fellowship (FT130100338).
Materials
| normal saline | Baxter International Inc | AHB1323 | Maintain corneal hydration during surgery |
| Chlorhexadine 0.5% | Orion Laboratories | 27411, 80085 | Disinfection of surgical instrument |
| Isoflurane 99.9% | Abbott Australasia Pty Ltd | CAS 26675-46-7 | Proprietory Name: Isoflo(TM) Inhalation anaaesthetic. Pharmaceutical-grade inhalation anesthetic mixed with oxygen gas for suture procedure |
| ocular lubricant | Alcon Laboratories | 1618611 | Proprietory Name: Genteal, ocular lubricant to keep the other eye moist |
| Needle holder (microsurgery) | World Precision Instruments | 555419NT | To hold needle during ocular surgery |
| Proxymetacaine 0.5% | Alcon Laboratories | CAS 5875-06-9 | Topical ocular analgesia |
| Scissors (microsurgery) | World Precision Instruments | 501232 | To cut excessive suture stump during ligation |
| Surgical drape | Vital Medical Supplies | GM29-612EE | Ensure sterile enviornment during surgery |
| Suture needle for rats (microsurgery) | Ninbo medical needles | 151109 | 8-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm |
| Suture needle for mice (microsurgery) | Ninbo medical needles | 160905 | 10-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm |
| Tweezers (microsurgery) | World Precision Instruments | 500342 | Manipulate tissues during ocular surgery |
| rebound tonometer | TONOLAB, iCare, Helsinki, Finland | TV02 | for intraocular pressure monitoring |
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