Un modelo de Glaucoma inducido por sutura de Circumlimbal en ratas y ratones
Summary
La hipertensión ocular crónica se induce mediante la aplicación de una sutura de circumlimbal en ratas y ratones, llevando al deterioro funcional y estructural de las células ganglionares de la retina compatibles con glaucoma.
Abstract
La sutura de circumlimbal es una técnica para inducir glaucoma experimental en roedores crónico elevando la presión intraocular (IOP), un conocido factor de riesgo para el glaucoma. Este protocolo muestra a una guía paso a paso sobre esta técnica en largo Evans ratas y ratones C57BL/6. Bajo anestesia general, se aplica una sutura en “jareta” en la conjuntiva, alrededor del Ecuador y por detrás del limbo del ojo. El ojo compañero sirve como un control no tratado. A lo largo de nuestro estudio, que fue un período de 8 semanas para ratas y 12 semanas para los ratones, IOP seguía elevada, regularmente medido por tonometría de rebote en animales conscientes sin anestesia tópica. En ambas especies, los ojos suturados demostraron electroretinograma características constantes con la disfunción retiniana interna preferencial. Tomografía de coherencia óptica demostró la reducción selectiva de la capa de fibra nerviosa retiniana. Histología de la retina de la rata en sección encontró reducido densidad celular en la capa de células ganglionares, pero ningún cambio en otras capas celulares. La coloración de las retinas de ratón montado en plano con un marcador específico de la célula del ganglio (RBPMS) confirmó la pérdida de células ganglionares. La sutura de circumlimbal es un simple, mínimamente invasiva y rentable manera de inducir hipertensión ocular que conduce a la lesión de la célula del ganglio en ratas y ratones.
Introduction
Los modelos animales proporcionan que una importante plataforma para la investigación del laboratorio de celular procesos de patogénesis subyacente de glaucoma, así como para evaluar las intervenciones terapéuticas potenciales. Varios modelos inducibles se han desarrollado para producir la elevación sostenida de la presión intraocular (PIO), el más importante factor de riesgo para el glaucoma. Los métodos que se han aplicado para elevar IOP incluyen: inyección de solución salina hipertónica en episcleral venas1, fotocoagulación con láser de la malla trabecular2 o de la venas limbal3y la inyección intracameral de sustancias tales como Ghost roja glóbulos4, microbeads5,6 y viscoelástico agentes7. Cada enfoque tiene sus ventajas y limitaciones.
Un buen modelo para el glaucoma debe imitar el proceso de la enfermedad, con mínima complicación como opacities trauma, inflamación y los medios de comunicación. Estas complicaciones están frecuentemente asociadas con los procedimientos utilizados para inducir la elevación del IOP y pueden confundir la interpretación de los resultados. Por ejemplo, paracentesis de cámara anterior, incluso cuando no se introducen sustancias extrañas, ha demostrado causar trauma e inflamación que no es representativa de cambio glaucomatoso típico8,9. Además de la importancia de evitar la inflamación, mantener la claridad óptica facilita en vivo imagen y electrofisiología para monitorear la progresión de la enfermedad. Aunque no está claro hasta qué punto estas complicaciones pueden afectar las investigaciones de la enfermedad, puede ser mejor evitar penetrar el ojo durante la inducción del modelo. El enfoque de sutura circumlimbal evita la penetración del globo y facilita en vivo evaluación longitudinal de la estructura retiniana y función. Más importante aún, este modelo difiere de los anteriores en su capacidad para volver IOP a valores basales por retiro de la sutura cuando sea necesario. Normalización de la PIO puede ser útil para el estudio celular y moleculares correlativos de ganglio reversible e irreversible de la célula lesión10,11,12,13,14.
Este artículo se centra en la técnica para la inducción del modelo. Caracterización de la lesión retiniana inducida por este modelo en ratas y ratones se puede encontrar en mayor detalle en otra parte15,16,17,18,19.
Protocol
Representative Results
Discussion
La sutura de circumlimbal es un nuevo modelo de la hipertensión ocular crónica. Además de los estudios de que los resultados representativos son con16,18, este modelo animal se ha utilizado en una serie de recientes estudios15,23,24,25 ,26. Comparación a través de estos informes anteriores demues…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo es financiado por la subvención del proyecto Consejo de investigación médica de Australia (1046203), beca de futuro de Consejo de investigación australiano (FT130100338) y nacional de salud.
Materials
| normal saline | Baxter International Inc | AHB1323 | Maintain corneal hydration during surgery |
| Chlorhexadine 0.5% | Orion Laboratories | 27411, 80085 | Disinfection of surgical instrument |
| Isoflurane 99.9% | Abbott Australasia Pty Ltd | CAS 26675-46-7 | Proprietory Name: Isoflo(TM) Inhalation anaaesthetic. Pharmaceutical-grade inhalation anesthetic mixed with oxygen gas for suture procedure |
| ocular lubricant | Alcon Laboratories | 1618611 | Proprietory Name: Genteal, ocular lubricant to keep the other eye moist |
| Needle holder (microsurgery) | World Precision Instruments | 555419NT | To hold needle during ocular surgery |
| Proxymetacaine 0.5% | Alcon Laboratories | CAS 5875-06-9 | Topical ocular analgesia |
| Scissors (microsurgery) | World Precision Instruments | 501232 | To cut excessive suture stump during ligation |
| Surgical drape | Vital Medical Supplies | GM29-612EE | Ensure sterile enviornment during surgery |
| Suture needle for rats (microsurgery) | Ninbo medical needles | 151109 | 8-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm |
| Suture needle for mice (microsurgery) | Ninbo medical needles | 160905 | 10-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm |
| Tweezers (microsurgery) | World Precision Instruments | 500342 | Manipulate tissues during ocular surgery |
| rebound tonometer | TONOLAB, iCare, Helsinki, Finland | TV02 | for intraocular pressure monitoring |
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