Modelo de apendicectomia Murina de colite crônica câncer colorretal associado por localização precisa do remendo de Caecal
Summary
O protocolo apresentado descreve uma remoção cirúrgica facile do apêndice (remendo caecal) em um rato seguido pela indução do cancro colorretal da doença de entranhas inflamatório-associado. Este modelo murino do apendicectomia permite a investigação do papel biológico do apêndice na patogénese da doença gastrintestinal humana.
Abstract
O apêndice humano foi recentemente implicado para desempenhar papéis biológicos importantes na patogénese de várias doenças complexas, tais como câncer colorretal, doença inflamatória intestinal, e doença de Parkinson. Para estudar a função do apêndice, um modelo de apendicectomia Murina associada à doença intestinal foi estabelecido e seu protocolo passo a passo é descrito aqui. Este relatório introduz um protocolo facile para a remoção caecal do remendo nos ratos seguidos pela indução química do cancro colorretal colite-associado crônico usando uma combinação de sódio do sulfato do dextrano (DSS) e do azoximetano (Aom). As pilhas específicas de IgA e a concentração de IgA foram reduzidas significativamente em cima da remoção do remendo caecal nos ratos C57BL/6 masculinos comparados àqueles no grupo Sham. Simultaneamente administrar 2% DSS e AOM resultaram em quase 80% de sobrevida de camundongos em grupos de Sham e apendicectomia sem perda significativa de peso corporal. Os resultados histológicos confirmaram a inflamação relativa ao cólon e os graus diferentes de adenocarcinoma. Este modelo pode ser usado para o estudo do papel funcional do apêndice em manter a homeostase da microbiota do intestino e a patogénese da colite e das malignidades do intestino, assim como para o desenvolvimento potencial de terapias de segmentação da droga.
Introduction
A apendicectomia clínica é um procedimento cirúrgico padrão que envolve a remoção do apêndice principalmente devido à inflamação (por exemplo, apendicite)1,2,3. No entanto, a função biológica do apêndice humano vermiforme permanece controversa4,5,6. O apêndice foi considerado como um remanescente vestigial que projeta-se do ceco no intestino grosso. Até recentemente, estudos evolucionários, imunológicos, morfológicos e microbiológicos sugeriram que o apêndice pode possuir funções distintas. Estas funções incluem a produção de imunoglobinas (por exemplo, IgA e IgG), uma variedade de células B e células T críticas para respostas imunes adaptativas dentro dos tecidos linfoides associados ao intestino (Galts), e reposição do intestino grosso com intestinal comensais 6 anos de , 7 anos de , 8 . º , 9 anos de , 10 de , 11 anos de , doze anos.
Os estudos epidemiológicos clínicos dos pacientes com apendicectomia prévio ou apendicite aguda igualmente revelaram seus papéis potenciais na patogénese de doenças humanas, tais como a doença de entranhas inflamatório (IBD), o cancro colorretal, e não-gastrintestinal distúrbios (por exemplo, doença de Parkinson e doença cardiovascular)13,14,15,16,17,18. Por exemplo, um grande estudo de coorte da população asiática com 75.979 pacientes com apendicectomia mostrou recentemente uma associação significativa entre a apendicectomia e o desenvolvimento subseqüente do câncer colorretal, uma das neoplasias malignas mais comuns com alta incidência e mortalidade14,19. Conformemente, estabelecer um modelo animal apropriado do apendicectomia que se assemelhe a um ser humano será útil investigar as funções biológicas e os mecanismos moleculars do apêndice na patogénese da doença.
Muitos mamíferos possuem um apêndice ou órgão apêndice-like, incluindo primatas, lagomorfos (por exemplo, coelhos), alguns roedores, e marsupiais20. Para animais de laboratório pequenos e comumente usados, o coelho possui o apêndice vermiforme morfologicamente parecido com o humano21,22, mas Galt no coelho é extremamente grande em comparação com o que em seres humanos, uma vez que a maioria dos os tecidos lymphoid são encontrados igualmente em Peyer ‘ remendos de s situados nos intestinos pequenos e grandes21. Adicionalmente, o coelho mostra uma estrutura folicular lymphoid diferente, uma distribuição da pilha de T, e uma densidade da imunoglobulina do ser humano, que faz o estudo de seus apêndices inadequados21.
Os camundongos são o modelo animal mais comumente utilizado para estudar a fisiopatologia humana e testar os vários therapuetics existentes e novos23,24,25. O único grande aglomerado branco linfoide no ápice do cécum em camundongos, conhecido como o remendo caecal, é pensado para executar funções semelhantes ao apêndice humano26,27,28. No entanto, é praticamente difícil separar o remendo caecal de cécum em camundongos. Até o momento, os procedimentos cirúrgicos comuns para induzir a apendicite em um modelo de camundongo envolvem uma incisão relativamente grande (por exemplo, 1 – 2 cm) através da parede abdominal para obter acesso a todo o cécum (tabela suplementar 1)29, 30,31,32,33,34,35,36.
Nisto, para gerar um modelo do apendicectomia associado com a doença gastrintestinal, este relatório apresenta um protocolo cirúrgico facile para a remoção caecal do remendo nos ratos. Isto é seguido pela administração combinada do agente genotóxico Aom e pelo agente pró-inflamatório DSS para a indução do cancro colorretal colite-associado similar àquele visto nos seres humanos. O IBD demonstrou ser um fator de risco do câncer intestinal37,38. A combinação do câncer colorretal associado à colite crônica induzida por Aom/DSS tem sido bem estabelecida, e os leitores podem se referir a Neufert et al., e Thaker et al. para procedimentos detalhados39,40. Este modelo reprodutível e rápido de apendicectomia Murina pode ser usado para estudar a inflamação intestinal modulada por apêndice e a microbiota do cólon, especialmente no desenvolvimento e progressão do IBD e do câncer colorretal.
Protocol
Representative Results
Discussion
Um modelo murino do apendicectomia do cancro colorretal colite-associado foi obtido usando etapas cirúrgicas com uma taxa de sobrevivência elevada nos ratos. Na maioria dos casos, desde que o cécum foi posicionado a parede abdominal (tabela suplementar 1, tabela suplementar 2, e Figura 2), era difícil prejudicar sua posição sem laparotomia. Neste protocolo cirúrgico, foi introduzido um passo fácil de tocar a colisão, e a avaliação quantitativa do local do cério t…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho é parcialmente apoiado por fundos de investigação fundamentais para a Universidade Central (G2018KY0302), fundo de desenvolvimento de investigação fundamental da Universidade (KT00062), Fundação Nacional de ciência natural da China (81870380), e prêmio de pesquisa clínica da Primeiro hospital afiliado da Universidade de Xi ‘ an Jiaotong na China (NO. XJTU1AF-CRF-2015-029). Os autores agradecem o Dr. Chengxin shi por suas sugestões técnicas durante a fase adiantada da exploração do modelo murino do apendicectomia, assim como o patologista Dr. XI Liu para a avaliação de H & e que mancham resultados da colite e dos tumores colorretal. Y.L. realizou a demonstração cirúrgica, fez a análise dos dados, e escreveu o rascunho do manuscrito; A JL, a GL, a Z.P. e a Y.M. participaram da preparação cirúrgica, coleções de tecidos e produção de vídeo; M realizou citometria de fluxo e ELISA; Q.W. e H.X. forneceram o suporte técnico de gerar um modelo murino clinicamente relevante; R.X.Z. projetou o estudo, supervisionou a pesquisa, e escreveu e comprovou o manuscrito; J.S. revisou o manuscrito.
Materials
| Azoxymethane（AOM | Sigma-Aldrich,Inc. | A5486 | |
| Dextran Sulfate Sodium Salt（DSS | MP Biomedicals,Inc. | 160110 | |
| Entoiodine | Shanghai likon high technology disinfection co. LTD | 310102 | |
| digital caliper | Ningbo yuanneng trading co. LTD | 4859263 | |
| 4-0 Silk Sutures | Yuanlikang co. LTD | 20172650032 | |
| 8-0 Prolene Sutures | Yuanlikang co. LTD | 20172650032 | |
| Electric coagulation pen | Chuang mei medical equipment co. LTD | 28221777292 | |
| disposable syringe 1ml | Shengguang medical products co. LTD | 3262-2014 | |
| disposable syringe 10ml | Shengguang medical products co. LTD | 3262-2014 | |
| 75% Medicinal alcohol | Shandong anjie high-tech disinfection technology co. LTD | 371402AAJ008 | |
| Pentobarbital sodium salt | Sigma-Aldrich,Inc. | 57-33-0 | |
| Physiological Saline | Shandong qidu pharmaceutical co. LTD | H37020766 | |
| Absorbent Cotton Swab | Henan ruike medical co., LTD | RK051 | |
| Surgical Instruments-Ophthalmic | Jinzhong Shanghai co.LTD | WA3050 |
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