A doença enxerto versus hospedeiro é uma grande complicação após o transplante de medula óssea alogênico. As células dendríticas desempenham um papel crítico na patogênese da doença enxerto-versus-hospedeiro. O artigo atual descreve uma nova plataforma de transplante de medula óssea para investigar o papel das células dendríticas no desenvolvimento da doença enxerto versus hospedeiro e o efeito enxerto-versus-leucemia.
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Artigo de método
Plataforma de transplante de medula óssea para investigar o papel das células dendríticas na doença enxerto-versus-hospedeiro
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
O transplante de medula óssea alogênico (TMO) é uma terapia eficaz para malignidades hematológicas devido ao efeito enxerto versus leucemia (GVL) para erradicar tumores. No entanto, sua aplicação é limitada pelo desenvolvimento da doença enxerto-versus-hospedeiro (GVHD), uma grande complicação da TMO. GVHD é evocado quando as células T nos enxertos doadores reconhecem alloantigen expresso por células receptoras e montam ataques imunológicos indesejados contra tecidos saudáveis receptores. Assim, as terapias tradicionais são projetadas para suprimir a aloreatividade das células T do doador. No entanto, essas abordagens prejudicam substancialmente o efeito GVL para que a sobrevivência do destinatário não seja melhorada. Compreender os efeitos das abordagens terapêuticas em TMO, GVL e GVHD é, portanto, essencial. Devido às capacidades de apresentação de antígenos e secreção de citocinas para estimular células T doadoras, as células dendríticas receptoras (DCs) desempenham um papel significativo na indução do GVHD. Portanto, direcionar dCs destinatários torna-se uma abordagem potencial para controlar o GVHD. Este trabalho fornece uma descrição de uma nova plataforma de TMO para investigar como os DCs host regulam as respostas GVH e GVL após o transplante. Também é apresentado um modelo eficaz de TMO para estudar a biologia do GVHD e gvl após o transplante.
Introdução
O transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas (TMO) é uma terapia eficaz para tratar malignidades hematológicas1,2 através do efeito enxerto-versus-leucemia (GVL)3. No entanto, os linfócitos doadores sempre montam ataques imunológicos indesejados contra tecidos receptores, um processo chamado doença enxerto-versus-hospedeiro (GVHD)4.
Os modelos murine de GVHD são uma ferramenta eficaz para estudar a biologia do GVHD e a resposta GVL5. Camundongos são um modelo animal de pesquisa econômico. São peque....
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Protocolo
Os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais Institucionais da Universidade da Flórida Central.
1. Indução GVHD
NOTA: O transplante de células de medula óssea alogênica (BM) (etapa 1.2) é realizado dentro de 24h após a irradiação. Todos os procedimentos descritos abaixo são realizados em ambiente estéril. Realize o procedimento em uma capa de cultura de tecido e use reagentes filtrados.
- Dia 0: Prepare os ratos receptores.
- Use camundongos do tipo selvagem feminino (WT) em um fundo BALB/c (CD45.2+ H2kd+), 10-12 semanas de idade como ....
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Resultados
O principal modelo B6 (H2kb)-BALB/C (H2kd)correspondeu de perto ao desenvolvimento do GVHD após o transplante(Figura 2). Todos os seis sinais clínicos gvhd estabelecidos anteriormente por Cooke et al.16 ocorreram nos receptores transplantados com células T WT-B6, mas não nos receptores transplantados apenas com BM (etapa 1,5), que representavam o grupo GVHD-negativo. Existem duas fases no desenvolvimento do GVHD n.......
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Discussão
O uso de células-tronco para se adequar a um indivíduo específico é uma abordagem eficaz para tratar cânceres avançados e resistentes18. Os fármacos de pequenas moléculas, no entanto, têm permanecido por muito tempo um foco primário da terapia personalizada contra o câncer. Por outro lado, na terapia celular uma infinidade de interações entre doador e hospedeiro pode influenciar decisivamente os desfechos do tratamento, como o desenvolvimento do GVHD após a TMO1.
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse.
Agradecimentos
Este estudo é apoiado pela Bolsa inicial da University of Central Florida College of Medicine (à HN), pela bolsa inicial do Centro Médico hillman Hillman (para a HL), pelo Bolsa de #1P20CA210300-01 do Ministério da Saúde dos Estados Unidos #4694 (para a PTH). Agradecemos ao Dr. Xue-zhong Yu da Universidade Médica da Carolina do Sul por fornecer materiais para o estudo.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 0,5 M EDTA pH 8,0 100ML | Fisher Scientific | BP2482100 | MACS buffer |
| 10X PBS | Fisher Scientific | BP3994 | MACS tampão |
| A20 Linfoma de células B | University of Central Florida | Experimento GVL | interno |
| ACC1 fl / fl | Jackson Lab | 30954 | Experimento GVL |
| ACC1 fl / fl CD4cre | University of Central Florida | Experimento GVL | |
| Anti-Biotina MicroBeads | Miltenyi Biotec | 130-090-485 | Enriquecimento de células T |
| Anti-Humano/Camundongo CD45R (B220) | Thermo Fisher Scientific | 13-0452-85 | Enriquecimento de células T |
| Anti-mouse B220 FITC | Thermo Fisher Scientific | 10452-85 | Análise de citometria de fluxo |
| Anti-mouse CD11c- AF700 | Thermo Fisher Scientific | 117319 | Análise de citometria de fluxo |
| Anti-Mouse CD25 PE | Thermo Fisher Scientific | 12-0251-82 | Coloração de fluxo |
| Anti-Mouse CD4 Biotina | Thermo Fisher Scientific | 13-0041-86 | Enriquecimento de células T |
| Anti-Mouse CD4 eFluor® 450 (Pacific Blue® substituição) | Thermo Fisher Scientific | 48-0042-82 | Coloração de fluxo |
| Anti-mouse CD45.1 PE | Thermo Fisher Scientific | 12-0900-83 | Análise de citometria de fluxo |
| Anti-Mouse CD8a APC | Thermo Fisher Scientific | 17-0081-83 | Análise de citometria de fluxo |
| Anti-mouse H-2Kb PerCP-Fluor 710 | Thermo Fisher Scientific | 46-5958-82 | Análise de citometria de fluxo |
| Anti-mouse MHC Classe II-anticorpo APC | Thermo Fisher Scientific | 17-5320-82 | Análise de citometria de fluxo |
| Anti-Mouse TER-119 Biotina | Thermo Fisher Scientific | 13-5921-85 | Enriquecimento de células T |
| Anti-Thy1.2 | Bio Excel | BE0066 | BM geração |
| B6 camundongos fB-/- | Universidade da Flórida Central | Destinatários internos | |
| B6. Camundongos Ly5.1 (CD45.1+) | Charles River | 564 | Doadores Camundongos |
| BALB/c | Charles River | 028 | Receptores de transplante Camundongos |
| C57BL/6 | Charles River | 027 | Doadores/Receptores |
| CD11b | Thermo Fisher Scientific | 13-0112-85 | Enriquecimento de células T |
| CD25-biotina | Thermo Fisher Scientific | 13-0251-82 | Enriquecimento de células T |
| CD45R | Thermo Fisher Scientific | 13-0452-82 | Enriquecimento de células T |
| CD49b Anticorpo monoclonal (DX5)-biotina | Thermo Fisher Scientific | 13-5971-82 | Enriquecimento de células T |
| Filtro celular 40 uM | Thermo Fisher Scientific | 22363547 | Preparação celular |
| Filtro celular 70 uM | Thermo Fisher Scientific | 22363548 | Preparação celular |
| D-Luciferina | Goldbio | LUCK-1G | Imagem de animais vivos |
| Soro bovino fetal (FBS) | Atlanta Bilogicals R & D sistema | D17051 | Cultura de células |
| Tubos de citometria de fluxo | Fisher Scientific | 352008 | Análise de citometria de fluxo |
| FVB/NCrl | Charles River | 207 | Doadores |
| Lipopolissacarídeo (LPS) | Millipore Sigma | L4391-1MG | DC coluna LS madura |
| Mitenyi Biotec | 130-042-401 | Preparação celular | |
| MidiMACS | Miltenyi Biotec | 130-042-302 | Enriquecimento de células T |
| New Brunswick Galaxy 170R incubadora | Eppendorf | Galaxy 170 R | Cultura de células |
| Penicilina + estreptomicinaPenicilina / estreptomicina (10.000 unidades de penicilina / 10.000 mg / ml de estreptococo) | GIBCO | 15140 | Mídia |
| RPMI 1640 | Thermo Fisher Scienctific | 11875-093 | Mídia |
| TER119 | Thermo Fisher Enriquecimento | de células T | 13-5921-82 |
| Xenogen IVIS-200 | Perkin Elmer | Xenogen IVIS-200 | Imagem de animais vivos |
| X-RAD 320 Irradiador Biológico | Precision X-RAY X-RAD | 320 | Irradiação Total do Corpo |
Referências
- Shlomchik, W. D. Graft-versus-host disease. Nature Reviews Immunology. 7, 340-352 (2007).
- Appelbaum, F. R. Haematopoietic cell transplantation as immunotherapy. Nature. 411, 385-389 (2001).
- Blazar, B. R., Murphy, W. J., Abedi, M.
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Reimpressões e permissões
