Summary
تستخدم نماذج مختلفة من انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAo) في أبحاث السكتة الدماغية التجريبية. هنا ، يتم وصف نموذج السكتة الدماغية التجريبية من MCAo عابرة عبر الشريان السباتي الخارجي (ECA) ، والذي يهدف إلى تقليد السكتة الدماغية البشرية ، والتي تتم إزالة خثرة الأوعية الدماغية بسبب تحلل الجلطة العفوية أو العلاج.
Abstract
السكتة الدماغية هي السبب الثالث الأكثر شيوعا للوفيات والسبب الرئيسي للإعاقة المكتسبة للبالغين في البلدان المتقدمة. حتى الآن، تقتصر الخيارات العلاجية على نسبة صغيرة من مرضى السكتة الدماغية في غضون الساعات الأولى بعد السكتة الدماغية. ويجري التحقيق على نطاق واسع في استراتيجيات علاجية جديدة، ولا سيما لإطالة فترة الوقت العلاجي. وتشمل هذه التحقيقات الحالية دراسة المسارات المرضية الهامة بعد السكتة الدماغية، مثل التهاب ما بعد السكتة الدماغية، وتولد الأوعية، واللدونة العصبية، والتجدد. 10 - على مدى العقد الماضي، تزايد القلق إزاء ضعف إمكانية استنساخ النتائج التجريبية والنتائج العلمية بين أفرقة البحث المستقلة. وللتغلب على ما يسمى "أزمة التكرار"، هناك حاجة ماسة إلى نماذج موحدة مفصلة لجميع الإجراءات. كجهد داخل اتحاد أبحاث "ضربة المناعة" (https://immunostroke.de/) ، يقترح نموذج فأر موحد لانسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر (MCAo). يسمح هذا النموذج بالاستعادة الكاملة لتدفق الدم عند إزالة خيوط الدم ، ومحاكاة تحلل الجلطة العلاجية أو العفوية التي تحدث في نسبة كبيرة من السكتات الدماغية البشرية. يتم عرض الإجراء الجراحي لهذا النموذج السكتة الدماغية "خيوط" وأدوات لتحليلها الوظيفي في الفيديو المصاحب.
Introduction
السكتة الدماغية هي واحدة من الأسباب الأكثر شيوعا للوفاة والعجز في جميع أنحاء العالم. على الرغم من أن هناك أساسا شكلين متميزين من السكتة الدماغية, نقص التروية والنزفية, 80-85٪ من جميع حالات السكتة الدماغية هي1الإقفارية . حاليا، يتوفر علاجان فقط للمرضى الذين يعانون من السكتة الدماغية: العلاج الدوائي باستخدام منشط بلازمينوجين الأنسجة المؤتلفة (rtPA) أو استئصال الجلطات الميكانيكية. ومع ذلك ، نظرا لتضييق الإطار الزمني العلاجي ومعايير الاستبعاد المتعددة ، يمكن لعدد مختار فقط من المرضى الاستفادة من خيارات العلاج المحددة هذه. على مدى العقدين الماضيين، ركزت أبحاث السكتة الدماغية قبل السريرية والترجمة على دراسة النهج العصبية. ومع ذلك، فإن جميع المركبات التي وصلت إلى التجارب السريرية أظهرت حتى الآن أي تحسينات للمريض2.
وبما أن النماذج المختبرية لا يمكنها إعادة إنتاج جميع تفاعلات الدماغ والآليات المرضية الفسيولوجية للسكتة الدماغية بدقة، فإن النماذج الحيوانية حاسمة لأبحاث السكتة الدماغية قبل السريرية. ومع ذلك ، فإن محاكاة جميع جوانب السكتة الدماغية البشرية في نموذج حيواني واحد غير ممكن ، حيث أن السكتة الدماغية مرض معقد للغاية وغير متجانس. لهذا السبب، تم تطوير نماذج مختلفة من السكتة الدماغية مع مرور الوقت في أنواع مختلفة. فوتوثيرومبوسيس من الشرايين الدماغية أو انسداد دائم من الشريان الدماغي الأوسط (MCA) هي نماذج شائعة الاستخدام التي تحفز الآفات الصغيرة والمحددة محليا في القشرة الجديدة3،4. وإلى جانب ذلك، فإن نموذج السكتة الدماغية الأكثر استخداما هو على الأرجح ما يسمى "نموذج خيوط"، حيث يتم تحقيق انسداد عابر من MCA. هذا النموذج يتكون من إدخال عابرة خيوط خياطة إلى أصل MCA, مما أدى إلى انخفاض مفاجئ في تدفق الدم الدماغي وانحشاء كبير لاحق من مناطق الدماغ تحت القشرية والقشرية5. على الرغم من أن معظم نماذج السكتة الدماغية تحاكي انسدادات MCA 6، فإن "نموذج خيوط" يسمح بتحديد دقيق للوقت الإقفاري. Reperfusion عن طريق إزالة خيوط يحاكي السيناريو السريري البشري لاستعادة تدفق الدم الدماغي بعد عفوية أو علاجية (rtPA أو استئصال الجلطات الميكانيكية) تحلل الجلطة. وحتى الآن، تم وصف تعديلات مختلفة لهذا "النموذج خيوط". في النهج الأكثر شيوعا، وصفت لأول مرة من قبل Longa وآخرون. في عام 19895، يتم إدخال خيوط مغلفة بالسيليكون عبر الشريان السباتي الشائع (CCA) إلى أصل MCA7. على الرغم من أنه نهج يستخدم على نطاق واسع ، إلا أن هذا النموذج لا يسمح بالاستعادة الكاملة لتدفق الدم أثناء التروية ، حيث يتم ربط CCA بشكل دائم بعد إزالة خيوط.
على مدى العقد الماضي، كان عدد متزايد من مجموعات البحث مهتمة بنمذجة السكتة الدماغية في الفئران باستخدام هذا "نموذج خيوط". ومع ذلك ، فإن التباين الكبير في هذا النموذج وعدم توحيد الإجراءات هي بعض أسباب التباين العالي وضعف استنساخ النتائج التجريبية والنتائج العلمية المبلغ عنها حتى الآن2،8. السبب المحتمل ل "أزمة النسخ المتماثل" الحالية ، في إشارة إلى انخفاض القابلية للاستنساخ بين مختبرات الأبحاث ، هو أحجام احتشاء السكتة الدماغية غير القابلة للمقارنة بين مجموعات البحث باستخدام نفس المنهجية التجريبية9. في الواقع، بعد إجراء أول دراسة تجريبية متعددة المراكز معشاة قبل السريرية10،تمكنا من تأكيد أن عدم وجود توحيد كاف لنموذج السكتة الدماغية التجريبي هذا ومعلمات النتائج اللاحقة كانت الأسباب الرئيسية لفشل الاستنساخ في الدراسات قبل السريرية بين المختبرات المستقلة11 . هذه الاختلافات الجذرية في أحجام العجش الناتجة ، على الرغم من استخدام نفس نموذج السكتة الدماغية ، تشكل بشكل مبرر ليس فقط تهديدا للبحث التأكيدي ، ولكن أيضا للتعاون العلمي بسبب عدم وجود نماذج قوية وقابلة للاستنساخ.
وفي ضوء هذه التحديات، فنحن نهدف إلى وضع ووصف مفصل للإجراءات المتعلقة بنموذج موحد عابر للماكاو على النحو المستخدم في جهود البحث التعاونية داخل اتحاد البحوث "مناعة" (https://immunostroke.de/). يهدف هذا الاتحاد إلى فهم التفاعلات بين الدماغ والمناعة الكامنة وراء المبادئ الميكانيكية لاستعادة السكتة الدماغية. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تقديم الأساليب النسيجية والوظيفية ذات الصلة لتحليل نتائج السكتة الدماغية. وتستند جميع الأساليب على إجراءات التشغيل القياسية المعمول بها المستخدمة في جميع مختبرات البحوث التابعة لاتحاد ضربة المناعة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
أجريت التجارب التي تم الإبلاغ عنها في هذا الفيديو وفقا للمبادئ التوجيهية الوطنية لاستخدام الحيوانات التجريبية، ووافقت اللجان الحكومية الألمانية على البروتوكولات (ريجيرونغ فون أوبربايرن، ميونيخ، ألمانيا). تم استخدام الفئران الذكور C57Bl/6J البالغ من العمر عشرة أسابيع وإيواؤها تحت درجة حرارة خاضعة للرقابة (22 ± 2 درجة مئوية) ، مع فترة دورة خفيفة داكنة مدتها 12 ساعة والوصول إلى الطعام المكريه وضوء libitum الإعلاني.
1. إعداد المواد والصكوك
- قم بتوصيل بطانية الحرارة للحفاظ على درجة حرارة منطقة العملية ودرجة حرارة جسم الماوس أثناء التخدير عند 37 درجة مئوية.
- مقص الأوتوكلاف والملقط، وإعداد محلول الإيثانول 70٪ والحفاظ على مرهم العين dexpanthenol المتاحة، عدة قطع من القطن، و5-0 المغلفة مضفر البوليستر خياطة جاهزة للاستخدام. إعداد حقنة 1 مل مع محلول ملحي 0.9٪ (بدون إبرة) للحفاظ على موقع شق الحيوان رطب. إعداد غاز التخدير (100٪ O2 + isoflurane).
- إعداد حامل للمسبار دوبلر الليزر عن طريق قطع غيض من طرف أنبوب 10 ميكرولتر (3-5 ملم طول).
ملاحظة: يتم تعقيم جميع الأدوات باستخدام معقم حبة ساخنة. كما يتم تطهير الأسطح قبل وبعد الجراحة برذاذ مطهر ميكروبي. قبل الجراحة ، يتم تطهير المناطق المحيطة برأس وصدر الفئران برذاذ تطهير الجرح.
2. إعداد دوبلر الليزر
- حقن مسكن إلى الماوس 30 دقيقة قبل الجراحة (4 ملغ / كغ كاربروفين و 0,1 ملغ / كغ بوبرينورفين, intraperitoneally).
- تخدير الماوس عن طريق وضعه في غرفة التعريفي مع معدل تدفق isoflurane من 4٪ حتى وقف حركة الجسم العفوية وvibrissae.
- ضع الماوس في وضع عرضة في منطقة العملية مع أنفه في قناع التخدير. الحفاظ على تركيز ايزوفلوران في 4٪ لمدة دقيقة أخرى، ثم تقليله والاحتفاظ بها في 2٪.
- قم بتعيين لوحة التدفئة المرتبطة بالتغذية المرتدة للحفاظ على درجة حرارة جسم الماوس عند 37 درجة مئوية، وأدخل مسبار المستقيم برفق لمراقبة درجة الحرارة طوال العمليات الجراحية.
- تطبيق مرهم العين dexpanthenol على كلتا العينين.
- تطهير الجلد والشعر المحيط بالعين اليسرى والأذن مع الإيثانول 70٪.
- قطع فروة الرأس بين الأذن اليسرى والعين (1 سم طويلة) لفضح عظم الجمجمة.
- قطع وتقاعد العضلات الزمنية لتصور MCA تحت الجمجمة.
- إصلاح مع الغراء الجزء الخارجي من طرف عقد التحقيق دوبلر الليزر / الألياف على رأس MCA اليسار مع الغراء. ثم، الغراء الجلد لإغلاق الجرح حول حامل الطرف. تطبيق 2-3 قطرات من الغراء تصلب لتسريع العملية. تأكد من أن الليزر الألياف دوبلر ليست لصقها ويمكن إزالتها بسهولة من حامل تلميح في أي وقت.
3. نموذج MCAo عابرة (انسداد)
- تحويل الماوس إلى موقف سوبين. وضع خطم في مخروط التخدير وإصلاح الكفوف مع الشريط.
- تطهير الجلد والشعر المحيطة الصدر وجعل شق خط الوسط 2 سم طويلة في الرقبة.
- استخدام ملقط لسحب الجلد والغدد شبه الفكية وبصرف النظر. استخدم الواجهات للاحتفاظ بالعضلات القصية، وكشف المجال الجراحي والعثور على الشريان السباتي الأيسر الشائع (CCA). تشريح CCA خالية من النسيج الضام والأعصاب المحيطة بها (دون الإضرار العصب المبهم) وإجراء ربط عابرة قبل التشعب.
- تشريح الشريان السباتي الخارجي (ECA) وربط عقدة دائمة في الجزء الأكثر وضوحا البعيدة. ضع خياطة أخرى تحت اللجنة الاقتصادية لأفريقيا ، على مقربة من التشعب ، وإعداد عقدة فضفاضة لاستخدامها في وقت لاحق.
- تشريح الشريان السباتي الداخلي (ICA) ووضع مقطع الأوعية الدموية الدقيقة على ذلك، 5 مم على التشعب. تأكد من عدم تلف العصب المبهم.
- قطع ثقب صغير في اللجنة الاقتصادية لأفريقيا بين ربط ضيق وفضفاضة; كن حذرا من قطع اللجنة الاقتصادية لأفريقيا بأكملها.
- أدخل خيوط وتقدم نحو CCA. تشديد الربط فضفاضة في اللجنة الاقتصادية لأفريقيا حول التجويف لتأمين خيوط قريبا في هذا الموقف وتجنب النزيف عند إزالة مقطع الأوعية الدموية الدقيقة.
- إزالة مقطع الأوعية الدموية الدقيقة وإدراج خيوط من خلال ICA حتى يتم التوصل إلى أصل MCA عن طريق الكشف عن انخفاض حاد (>80٪) في تدفق الدم الدماغي كما يقاس دوبلر الليزر. إصلاح خيوط في هذا الموقف عن طريق تشديد عقدة حول اللجنة الاقتصادية لأفريقيا.
ملاحظة: عندما يذهب خيوط نحو الاتجاه المناسب، فإنه يتقدم بسلاسة، وينبغي أن يلاحظ أي مقاومة. - سجل قيم دوبلر بالليزر قبل وبعد إدراج خيوط.
- إزالة النازل ونقل العضلات القصية والغدد تحت الفكية قبل خياطة الجرح. إزالة الليزر دوبلر التحقيق، ووضع الحيوان في غرفة الانتعاش في 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة (حتى إزالة خيوط).
4. نموذج MCAo عابرة (Reperfusion)
- تخدير الماوس عن طريق وضعه في غرفة التعريفي مع معدل تدفق isoflurane من 4٪ حتى وقف حركة الجسم العفوية وvibrissae.
- تطبيق مرهم العين dexpanthenol على كلتا العينين.
- ضع الماوس في وضع عرضة في منطقة العملية مع خطمه في قناع التخدير. الحفاظ على تركيز ايزوفلوران في 4٪ لمدة دقيقة أخرى، ثم تقليله والاحتفاظ بها في 2٪. إصلاح الكفوف الحيوان مع الشريط.
- أدخل مسبار دوبلر الليزري في حامل المسبار.
- إزالة خياطة الجرح، واستخدام ملقط لسحب الجلد والغدد شبه الفكية وبصرف النظر. استخدم الواجهات لسحب عضلات الورم القصي برفق وكشف المجال الجراحي.
- تخفيف خياطة ECA التي تشدد خيوط، وسحب بلطف خيوط. تجنب إتلاف طلاء السيليكون المطاطي للخيوط أثناء الإزالة.
- ربط بإحكام خياطة اللجنة الاقتصادية لأفريقيا.
- تأكيد الزيادة في تدفق الدم الدماغي في جهاز دوبلر الليزر (>80٪ من القيمة الأولية قبل إعادة التروية).
- سجل قيم دوبلر الليزر قبل وبعد إزالة خيوط.
- فتح الربط عابرة قبل التشعب من CCA.
- إزالة النازل، ونقل العضلات القصية والغدد تحت الفكية قبل خياطة الجرح. ضع الحيوان في غرفة الإنعاش عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة للتعافي من التخدير.
- بعد الشفاء، أعد الفئران إلى أقفاصها في غرفة يتم التحكم في درجة حرارتها.
- رعاية الحيوانات عن طريق إضافة الكريات الغذائية الرطبة وhy hydrogel في أطباق بيتري الصغيرة على أرضية القفص حتى اليوم 3 بعد الجراحة.
- حقن مسكن كل 12 ساعة لمدة 3 د بعد الجراحة (4 ملغم / كغ كاربروفين و 0.1 ملغ / كغ بوبرينورفين).
5. عملية الشام
- إجراء جميع الإجراءات كما هو موضح أعلاه، بما في ذلك ربط الشرايين وإدخال خيوط (الخطوات 1-3.7).
- إزالة خيوط مباشرة بعد الإدراج. ثم ضع الحيوان في غرفة الإنعاش لمدة ساعة واحدة.
- ضع الحيوان في منطقة العملية مرة أخرى ، وأزل الربط العابر ل CCA لضمان استعادة تدفق الدم الدماغي الكامل.
- خياطة الجرح، ووضع الحيوان في غرفة الانتعاش في 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة للتعافي من التخدير. بعد الشفاء، أعد الفئران إلى أقفاصها في غرفة يتم التحكم في درجة حرارتها.
- رعاية الحيوانات عن طريق إضافة الكريات الغذائية الرطبة وhy hydrogel في أطباق بيتري الصغيرة على أرضية القفص حتى اليوم 3 بعد الجراحة.
- حقن مسكن كل 12 ساعة لمدة 3 د بعد الجراحة (4 ملغم / كغ كاربروفين و 0.1 ملغ / كغ بوبرينورفين).
6. العصبية
- قم بإجراء العصبية دائما في نفس الوقت من اليوم، واستخدم الملابس الجراحية للحفاظ على "رائحة محايدة" بين الجراحين الفرديين.
- دع الفئران ترتاح لمدة 30 دقيقة في الغرفة مع قفص "مفتوح" قبل الاختبار.
- لاحظ كل بند في الجدول 1 والجدول 2 لمدة 30 s.
7. التشوه داخل القلب
- إعداد حقنة 20 مل تحتوي على المالحة العازلة بالفوسفات (PBS) - الهيبارين (2 U / mL) ووضعها 1 متر فوق مقاعد البدلاء لتسهيل التشوه القائم على الجاذبية. (اختياري: إجراء التشوه داخل القلب مع 4٪ بارافورمالديهايد (PFA) باستخدام حقنة 20 مل تحتوي على 4٪ PFA في PBS، pH 7.4).
- حقن إينتريبيريتونالي 100 ميكرولتر من الكيتامين والزيلازين (120 و 16 ملغ / كغ وزن الجسم، على التوالي). انتظر 5 دقائق وتأكد من توقف حركة الجسم العفوية وvibrissae.
- إصلاح الحيوان في موقف سوبين، وتطهير سطح الجسم البطن مع الإيثانول 70٪.
- إجراء شق بطول 3 سم في البطن. قطع الحجاب الحاجز، والأضلاع، وعظم القص لتصور القلب تماما.
- إجراء شق صغير في الأذين الأيمن، وإدراج قنية النتوئة في البطين الأيسر.
- Perfuse مع 20 مل من برنامج تلفزيوني الهيبارين.
- بعد التشوه، وقطع رأس الحيوان وإزالة الدماغ.
- تجميد الدماغ على مسحوق الجليد الجاف وتخزينها في -80 درجة مئوية حتى مزيد من الاستخدام.
8. قياس حجم العقائد
- للبكاء، استخدم نظام التبريد لقطع الأدمغة إلى أقسام سمكها 20 ميكرومتر كل 400 ميكرومتر. ضع المقاطع على الشرائح، وخزن الشرائح عند -80 درجة مئوية حتى الاستخدام.
- كريسيل البنفسجي (CV) تلطيخ
- إعداد محلول تلطيخ عن طريق اثارة والتدفئة (60 درجة مئوية) 0.5 غرام من خلات السيرة الذاتية في 500 مل من H2O حتى يتم حل بلورات. بعد تبريد الحل، قم بتخزينه في زجاجة داكنة. إعادة تسخين إلى 60 درجة مئوية وتصفية قبل كل استخدام.
- دع الشرائح تجف في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. تزج بها في الإيثانول 95٪ لمدة 15 دقيقة، في الإيثانول 70٪ لمدة 1 دقيقة، ثم في الإيثانول 50٪ لمدة دقيقة واحدة.
- تزج الشرائح في الماء المقطر لمدة 2 دقيقة. تحديث الماء المقطر ووضع الشرائح في الماء لمدة 1 دقيقة. بعد ذلك، اغمر الشرائح في محلول التلطيخ الذي تم تسخينه مسبقا لمدة 10 دقائق عند 60 درجة مئوية. غسل الشرائح مرتين في الماء المقطر لمدة 1 دقيقة.
- تزج الشرائح في الإيثانول 95٪ لمدة 2 دقيقة. وضعها في الإيثانول 100٪ لمدة 5 دقائق. تحديث الإيثانول 100٪ ووضع الشرائح مرة أخرى في الإيثانول لمدة 2 دقيقة. بعد ذلك، قم بتغطية الشرائح باستخدام وسيطة متزايدة.
- تحليل (الشكل 4C)
- مسح الشرائح وتحليل وحدة التخزين غير المباشرة من قبل أسلوب سوانسون12 لتصحيح الوذمة باستخدام المعادلة التالية:
(منطقة الإقفارية) = (منطقة الإقفارية)-((نصف الكرة الأرضية ipsilateral)-(نصف الكرة الأرضية))
- مسح الشرائح وتحليل وحدة التخزين غير المباشرة من قبل أسلوب سوانسون12 لتصحيح الوذمة باستخدام المعادلة التالية:
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
النموذج الموصوف هنا هو تعديل لنموذج السكتة الدماغية "خيوط" شائع الاستخدام ، والذي يتكون من إدخال خيوط مغلفة بالسيليكون من خلال اللجنة الاقتصادية لأفريقيا لمنع أصل MCA(الشكل 1). بعد إزالة خيوط، توقف تدفق الدم فقط في اللجنة الاقتصادية لأفريقيا بشكل دائم، مما يسمح بإعادة صياغة كاملة للCCA وICA. وهذا يسمح بإعادة التروية الكافية للدماغ(الشكل 2)،على غرار الحالة التي لوحظت بعد انحلال الجلطات الدوائية الناجحة أو استئصال الجلطات الميكانيكية في المرضى البشر. وعلاوة على ذلك، يصف هذا العمل أيضا طريقة لقياس تدفق الدم الدماغي خلال كل من إجراءات الانسداد والتشويش عن طريق إصلاح قنية متصلة بمسبار دوبلر بالليزر في الجمجمة فوق إقليم MCA.
معدل الوفيات الإجمالي للعملية الجراحية هو <5٪ عند إجراء جراح مدرب. في وقت مبكر من النقاط بعد MCAo ، والحيوانات عموما تقديم العجز الوضعي والحركة الشديدة ، والضعف العام ، وفقدان وزن الجسم13. هذه العجز الحاد عابرة، وتظهر الحيوانات تحسن النشاط بعد ما يقرب من 1 أسبوع. وبالتالي ، فإن العجز أكثر تحديدا للأعراض العصبية المحورية.
تم تقييم العجز السلوكي بعد انسداد MCA من قبل Neuroscore المركب14؛ تم قياس العجز العام والتنسيقي 24 ساعة و 3 د بعد الجراحة. تدمج Neuroscore العامة 5 عناصر (الجدول 1) ، بما في ذلك تقييم الفراء والأذنين والعينين والموقف والنشاط العفوي ، بحد أقصى 18. يتكون Neuroscore البؤري من 7 عناصر(الجدول 2)، بما في ذلك تقييم تماثل الجسم والمشي والتسلق وسلوك الدوران والتماثل الأمامي وركوب الدراجات الإلزامي واستجابة الشعيرات ، بحد أقصى 28 درجة. ويتراوح المقياس المركب بين صفر (بدون عجز) و46 (انخفاضات شديدة). قدمت السكتة الدماغية تغييرا كبيرا في Neuroscore المركبة والتنسيقية ، ولكن ليس في Neuroscore العامة ، بالمقارنة مع الحيوانات الصورية(الشكل 3).
كما تم إجراء قياس حجم العقورة باستخدام تلطيخ كريسيل البنفسجي من أقسام الدماغ التسلسلي التاجي 24 ساعة بعد تحريض السكتة الدماغية. وكان متوسط حجم احتشاء 61.69 ملم3, تمثل 48٪ من نصف الكرة المخ المتضررة (الشكل 4). عند إجراء جراح مدرب ، يكون التباين العام لنموذج السكتة الدماغية هذا منخفضا ، مع معامل اختلاف <6٪. تشمل منطقة الآفة القشرة الحسية والقشرة الحركية وكذلك الهياكل تحت القشرية مثل المخطط(الشكل 4).
الشكل 1:مخطط للوصول والحصر داخل الألومنيوم MCA. يتم إدراج خيوط (خط منقط) بين عقدة خياطة قريبة وبعيدة في اللجنة الاقتصادية لأفريقيا وتقدم على طول ICA حتى تصل إلى أصل MCA (انظر inset). وبمجرد أن يتم وضع اللجنة الاقتصادية لأفريقيا في مكانها، يتم ربطها بخياطة لإصلاح الخيط. الاختصارات: ACA = الشريان الدماغي الأمامي. BA = الشريان باسيلار; CCA = الشريان السباتي المشترك; ECA = الشريان السباتي الخارجي; ICA = الشريان السباتي الداخلي. MCA = الشريان الدماغي الأوسط; PCA = الشريان الخلفي التواصل; PTG = الشريان pterygopalatine. وقد تم تعديل هذا الرقم من جاكمانوآخرون. 15. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: تدفق الدم أثناء انسداد و reperfusion. يتم تسجيل تدفق الدم قبل وبعد إدخال خيوط وقبل وبعد إزالة خيوط. لوحظ انخفاض في تدفق الدم أثناء انسداد واستعادة تدفق الدم أثناء التروية. كل لون يمثل واحد. المختصرات: MCA = الشريان الدماغي الأوسط. CBF = تدفق الدم الدماغي; وحدة A.U. = وحدات عشوائية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: Neuroscore للعجز الوظيفي بعد tMCAo. (أ) المجموع ، (ب) التنسيق ، و (ج) العصبية العامة قبل و 24 ح و 3 د بعد tMCAo. فتح الحانات: صورية; أشرطة سوداء: tMCAo. n = 10 لكل مجموعة. *p < 0.05. الاختصارات: tMCAo = انسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر؛ BL = قبل tMCAo. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4: تحليل احتشاء الحجمي والنتيجة العقائدية 24 ح بعد tMCAo. (أ) ممثل كريسيل البنفسجي الملطخة أقسام الدماغ التاجي كل 400 ميكرومتر في 24 ساعة بعد tMCAo. خطوط متقطعة ترسيم منطقة الآفة. (ب)تحليل حجم احتشاء 10 أدمغة (كل نقطة تمثل الدماغ الفردية) 24 ساعة بعد tMCAo. يمثل الخط الأحمر الأفقي الوسط (61.69 مم3)،وتشير أشرطة الخطأ إلى الانحراف المعياري (3.78 مم3). (C) صورة تمثيلية لحساب حجم العقوبة من مقطع تاجي بنفسجي كريسيل. الأزرق = نصف الكرة الأرضية؛ الأحمر = نصف الكرة الأرضية؛ منطقة مخططة شاحبة = منطقة الإقفارية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| نقطة زمنية للتسجيل | نقاط | ||
| العصبية العامة | شعر | 0. الشعر أنيق ونظيفة | |
| 1. piloerection المترجمة والشعر القذر في 2 أجزاء الجسم (الأنف والعينين) | |||
| 2. Piloerection والشعر القذر في >2 أجزاء الجسم | |||
| آذان (الماوس على أعلى مقاعد البدلاء مفتوحة) | 0. عادي (وتمتد الأذنين أفقيا وخلف، فإنها تتفاعل عن طريق استقامة الضوضاء التالية) | ||
| 1. امتدت أفقيا ولكن ليس وراء (واحد أو كليهما)، فإنها تتفاعل مع الضوضاء | |||
| 2. نفس 1. لا رد فعل على الضوضاء. | |||
| عيون (الماوس على OBT) | 0. فتح ونظيفة ومتابعة بسرعة البيئة المحيطة بها | ||
| 1. مفتوحة وتتميز مخاط مائي. اتبع ببطء البيئة المحيطة | |||
| 2. فتح وتتميز المخاط الداكن | |||
| 3. شكل بيضاوي الشكل ويتميز المخاط الداكن | |||
| 4. مغلق | |||
| الموقف (ضع الماوس على النخيل والتأرجح بلطف) | 0. الماوس يقف في وضع مستقيم مع موازاة الظهر إلى النخيل. أثناء التأرجح ، فإنه يقف بسرعة. | ||
| 1. الماوس تقف الحدباء. أثناء الأرجوحة ، فإنه يسطح الجسم للحصول على الاستقرار. | |||
| 2. الرأس أو جزء من الجذع تقع على النخيل. | |||
| 3. الماوس يكمن على جانب واحد، بالكاد قادرة على استعادة الموقف تستقيم. | |||
| 4. الماوس يكمن في موقف عرضة، غير قادر على استعادة وضع تستقيم. | |||
| نشاط سبونتانيوس (الماوس على OBT) | 0.The الماوس هو تنبيه ويستكشف بنشاط. | ||
| 1.The الماوس يبدو في حالة تأهب، لكنه هادئ وبطىء. | |||
| 2.The الماوس يستكشف بشكل متقطع وببطء. | |||
| 3.The الماوس هو somnolent وخدر، وعدد قليل من الحركات على الفور. | |||
| 4.No حركات عفوية | |||
| مجموع النقاط للتسجيل العام | |||
| (عادي = 0 كحد أقصى = 18) | |||
الجدول 1: الدرجة العصبية العامة. تلقت الحيوانات ما بين 0 و 4 نقاط، اعتمادا على شدة، لكل من العجز العام الخمسة التي تم قياسها. ثم تضاف الدرجات في مختلف المناطق لتوفير مجموع الدرجات العامة التي تتراوح بين 0 إلى 18. تم تعديل هذا الجدول من Clark et al.14 . اختصار: OBT = فتح مقاعد البدلاء.
| نقطة زمنية للتسجيل | نقاط | ||
| البؤري العصبية | تماثل الجسم (الماوس على OBT، مراقبة خط الأنف الذيل) | 0. عادي (الجسم: الموقف العادي، الجذع مرتفعة من مقاعد البدلاء، مع الأمامية و hindlimbs يميل تحت الجسم. الذيل: مستقيم) | |
| 1. عدم التماثل طفيف (الجسم: يميل على جانب واحد مع الأمامية و hindlimbs يميل تحت الجسم. الذيل: عازمة قليلا) | |||
| 2. عدم التماثل المعتدل (الجسم: يميل على جانب واحد مع الأمامية و hindlimbs امتدت. الذيل: عازمة قليلا) | |||
| 3. عدم التماثل البارز (الجسم: عازمة، على جانب واحد يكمن على OBT. الذيل: عازمة) | |||
| 4. عدم التماثل الشديد (الجسم: عازمة للغاية، على جانب واحد يكمن باستمرار على OBT. الذيل: عازمة للغاية) | |||
| مشية (الماوس على OBT. ملاحظ دون إزعاج) | 0. عادي (مشية مرنة ومتناظرة وسريعة) | ||
| 1. قاسية، غير مرنة (الحدباء المشي، أبطأ من الماوس العادي) | |||
| 2. يعرج، مع حركات غير متماثلة | |||
| 3. يرتجف ، الانجراف ، السقوط | |||
| 4. لا يمشي تلقائيا (عندما حفز من خلال دفع بلطف يمشي الماوس لا يزيد عن 3 خطوات) | |||
| التسلق (الماوس على سطح 45س. ضع الماوس في وسط السطح الذي يمسك) | 0. عادي (الماوس يتسلق بسرعة) | ||
| 1. يتسلق مع الإجهاد، وضعف الأطراف الحاضر | |||
| 2. يحمل على المنحدر، لا تنزلق أو تسلق | |||
| 3. الشرائح المنحدر إلى أسفل، جهد غير ناجح لمنع الفشل | |||
| 4. الشرائح على الفور، أي جهد لمنع فشل | |||
| سلوك الدوران (الماوس على OBT، المراقبة الحرة) | 0. غياب سلوك الدوران | ||
| 1. في الغالب جانب واحد يتحول | |||
| 2. دوائر إلى جانب واحد ، وإن لم يكن باستمرار | |||
| 3. دوائر باستمرار إلى جانب واحد | |||
| 4. التمحور ، تمايل ، أو أي حركة | |||
| التماثل الأمامي (الماوس معلق بالذيل) | 0. عادي | ||
| 1. عدم التماثل الخفيف: انثناء خفيف من الأطراف الأمامية الكونترالاتية | |||
| 2. عدم التماثل ملحوظ: المرن ملحوظ من طرف موانع، والجسم ينحني قليلا على الجانب ipsilateral | |||
| 3. عدم التماثل البارز: الأطراف الأمامية العكسية تلتزم الجذع | |||
| 4. عدم التماثل طفيف، لا حركة الجسم / الطرف | |||
| الدوران الإلزامي (الأطراف الأمامية على مقاعد البدلاء ، الأطراف الخلفية المعلقة من الذيل: يكشف عن وجود شلل الطرف الكونترالاتال) | 0. غائب. التمديد الطبيعي لكلا الأطراف الأمامية | ||
| 1. الميل إلى التحول إلى جانب واحد (الماوس يمتد على حد سواء الأمامية، ولكن يبدأ في تحويل ويفضل أن يكون إلى جانب واحد) | |||
| 2. دوائر إلى جانب واحد (يتحول الماوس نحو جانب واحد مع حركة أبطأ مقارنة مع الفئران صحية) | |||
| 3. محاور إلى جانب واحد ببطء (الماوس يتحول نحو جانب واحد فشل في أداء دائرة كاملة) | |||
| 4. لا تقدم (الجزء الأمامي من الجذع تقع على مقاعد البدلاء، وحركات بطيئة ولفترة وجيزة) | |||
| استجابة شعيرات (الماوس على OBT) | 0. عادي | ||
| 1. عدم التماثل الخفيف (الماوس ينسحب ببطء عندما حفز على الجانب contralateral) | |||
| 2. عدم التماثل البارز (لا توجد استجابة عند تحفيزه على الجانب المقابل) | |||
| 3. غياب استجابة contralaterally، استجابة بطيئة عندما حفز ipsilaterally | |||
| 4. غياب الاستجابة على الصعيد الثنائي | |||
| مجموع نقاط العجز البؤري | |||
| (عادي = 0 كحد أقصى = 28) | |||
الجدول 2: البؤري العصبي. تلقت الحيوانات ما بين 0 و 4 نقاط اعتمادا على شدة كل من العجز العام السبعة التي تم قياسها. ثم تضاف الدرجات في مختلف المجالات لتوفير مجموع نقاط التنسيق تتراوح بين 0 إلى 28. تم تعديل هذا الجدول من Clark et al.14 . اختصار: OBT = فتح مقاعد البدلاء.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
يصف هذا البروتوكول نموذجا تجريبيا للسكتة الدماغية يستند إلى اتفاق توافقي بين اتحاد أبحاث ألماني متعدد المراكز ("ImmunoStroke") لإنشاء نموذج موحد عابر ل MCAo. نموذج MCAo عابرة التي أنشئت من خلال إدخال خيوط مغلفة السيليكون من خلال اللجنة الاقتصادية لأفريقيا إلى أصل MCA هي واحدة من نماذج السكتة الدماغية الأكثر استخداما على نطاق واسع لتحقيق إعادة التروية الشريانية بعد فترة انسداد محددة. لذلك، يمكن اعتبار هذا الإجراء نموذج السكتة الدماغية ذات الصلة ترجمة.
"نموذج خيوط" المقدمة في الفيديو لديه بعض المزايا بالمقارنة مع غيرها من نماذج السكتة الدماغية الموصوفة سابقا، مثل عدم الحاجة إلى استئصال القحف وتحقيق إعادة التروية الكاملة للوعاء المغلق عابرا. ومع ذلك ، يمكن اعتبار تعقيد التدخل الجراحي قيدا ، لأنه يشمل الجراحة الغازية والتلاعب الدقيق بالشرايين المختلفة على مقربة من القصبة الهوائية والعصب المبهم. التعرض الطويل للحيوان إلى التخدير يمكن أيضا أن يكون عاملا حاسما للنظر، كما تم بالفعل توثيق تأثير التخدير على الحماية العصبية ونتائج السكتة الدماغية بشكل جيد16. وأخيرا، على الرغم من تعقيد هذا الإجراء الجراحي، يمكن أن تكتمل في حوالي 20 دقيقة عند تنفيذها من قبل جراح مدرب.
على النقيض من "خيوط" البروتوكولات السكتة الدماغية17وصفها سابقا ، فإن الطريقة الموصوفة هنا يسمح أيضا لقياس تدفق الدم الدماغي خلال مرحلتي الانسداد والتشويش. يمكن أن يكون رصد تدفق الدم أثناء التروية معلمة مهمة لمنعإصابة إعادةالتروية الدماغية 18 ، والتي من المعروف أنها تسبب عواقب ضارة في المرضى الذين يخضعون لتدخلات دوائية أو داخلية لإعادة زراعة الأوعية الدموية. على الرغم من التناقضات بين عواقب استعادة تدفق الدم الدماغي بعد MCAo19، فإن تقلب استعادة تدفق الدم بعد السكتة الدماغية قد يؤثر على الأحداث المرضية والبيوكيميائية في الدماغ ، وكذلك حجم الخطية والعجز العصبي لفئران السكتة الدماغية20. لذلك ، في هذا النموذج ، فإن الترميم الكامل لتدفق الدم وتسجيله متطلبات لضمان احتشاءات قابلة للاستنساخ بين الفئران ، خاصة في دراسات السكتة الدماغية التحويلية.
معدل الوفيات الإجمالي أثناء العملية الجراحية أقل من 5٪ وينجم بشكل رئيسي عن مضاعفات مخدرة أو نزيف أو تضحية بسبب معايير استبعاد محددة مسبقا. هذا النموذج السكتة الدماغية يقدم, ومع ذلك, معدل وفيات معتدلة ضمن أول 24-48 ح بعد تحريض السكتة الدماغية, التي يمكن أن تزيد من عدد الحيوانات اللازمة لكل تجربة لتحقيق مجموعة كافية من الفئران السكتة الدماغية. من حيث حجم العقائد ، يحفز هذا النموذج احتشاءات كبيرة ، مع آفات تشمل ما يصل إلى 50٪ من نصف الكرة الأرضية. كما أنه ينتج وذمة الدماغ، مما يؤثر على مناطق الدماغ المختلفة، بما في ذلك المناطق القشرية وشبه القشرية.
ولتحقيق تباين منخفض وقابلية عالية لإعادة إنتاج نموذج السكتة الدماغية، ينبغي مراعاة عدة معايير استبعاد، بما في ذلك: 1) وقت التشغيل > 20 دقيقة؛ (2) إعادة إنتاج نموذج السكتة الدماغية؛ (2) إعادة إنتاج نموذج الإصابة بالسكتة الدماغية؛ (2) إعادة إنتاج النماذج التي يمكن أن تكون قابلة للانخفاض؛ (2) إعادة إنتاج نموذج السكتة الدماغية؛ (2) إعادة إنتاج نموذج السكتة الدماغية؛ (2) إعادة إنتاج ال 2) >20٪ من انخفاض تدفق الدم عندما يتم ربط CCA (الخطوة 3.3)؛ 3) انخفاض تدفق الدم أثناء الانسداد < 80٪ من القيمة الأولية قبل الانسداد؛ و 4) تدفق الدم زيادة 10 دقيقة بعد معدل إعادة التروية <80٪ مقارنة بقيمة ما قبل التروية. بالنسبة لجراح متمرس ومدرب ، لا يتم استبعاد أي بسبب معيار وقت العملية. ومع ذلك، 10-15٪ من الحيوانات تظهر انخفاضا بنسبة 20٪ في تدفق الدم عند ربط CCA، و 5-10٪ لا تظهر أي انخفاض أو زيادة كافية في تدفق الدم أثناء انسداد أو إعادة التروية، على التوالي. لذلك، فإن معدل النجاح بعد استبعاد الحيوانات على أساس هذه المعايير هو حوالي 75-85٪.
بالإضافة إلى ذلك ، يتم فحص الحيوانات يوميا بعد MCAo (وزن الجسم ودرجة الحرارة والسلوك الفسيولوجي الأساسي) للسيطرة على المرض أو الألم أو سلوك عدم الراحة. بالإضافة إلى هذه الرعاية العامة، تم تطوير العديد من الاختبارات لتحليل سلوكي محدد بعد نقص التروية البؤري في الدماغ، على الرغم من جميع الاختبارات المعروفة لتقييم الخلل الحسي الحركي، مثل اختبار الروتارد21،اختبار الملصقالملصق 22،اختبار الزاوية23،أو اختبار الأسطوانة24. هنا ، تم تقييم الحيوانات المختارة لإنشاء هذا النموذج السكتة الدماغية للعجز البؤري والعام ، لأن نموذج خيوط يحفز أيضا سلوك مرض السيتوكين مستقلة عن العجز البؤري (الحسي أو الحركي)25. معا، نموذج السكتة الدماغية "خيوط" الموصوفة هنا هو نموذج قيم للبحوث السكتة الدماغية الأساسية والترجمة. ويقترح هذا النموذج كنموذج موحد للسكتة الدماغية لاستخدامه في مواءمة نماذج السكتة الدماغية عبر المختبرات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ولا توجد مصالح متنافسة بين أصحاب البلاغ للكشف عنها.
Acknowledgments
نشكر جميع شركائنا في التعاون في اتحادات ضربة المناعة (FOR 2879 ، من الخلايا المناعية إلى استرداد السكتة الدماغية) على الاقتراحات والمناقشات. تم تمويل هذا العمل من قبل دويتشه Forschungsgemeinschaft (DFG، مؤسسة البحوث الألمانية) في إطار استراتيجية التميز الألمانية في إطار مجموعة ميونيخ لطب الأعصاب النظم (EXC 2145 SyNergy - الهوية 390857198) وبموجب المنح LI-2534/6-1، LI-2534/7-1 و LL-112/1-1.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 45° ramp | H&S Kunststofftechnik | height: 18 cm | |
| 5/0 threat | Pearsalls | 10C103000 | |
| 5 mL Syringe | Braun | ||
| Acetic Acid | Sigma Life Science | 695092 | |
| Anesthesia system for isoflurane | Drager | ||
| Bepanthen pomade | Bayer | ||
| C57Bl/6J mice | Charles River | 000664 | |
| Clamp | FST | 12500-12 | |
| Clip | FST | 18055-04 | |
| Clip holder | FST | 18057-14 | |
| Cotons | NOBA Verbondmitel Danz | 974116 | |
| Cresyl violet | Sigma Life Science | C5042-10G | |
| Cryostat | Thermo Scientific CryoStarNX70 | ||
| Ethanol 70% | CLN Chemikalien Laborbedorf | 521005 | |
| Ethanol 96% | CLN Chemikalien Laborbedorf | 522078 | |
| Ethanol 99% | CLN Chemikalien Laborbedorf | ETO-5000-99-1 | |
| Filaments | Doccol | 602112PK5Re | |
| Fine 45 angled forceps | FST | 11251-35 | |
| Fine forceps | FST | 11252-23 | |
| Fine Scissors | FST | 14094-11 | |
| Glue | Orechseln | BSI-112 | |
| Hardener Glue | Drechseln & Mehr | BSI-151 | |
| Heating blanket | FHC DC Temperature Controller | ||
| Isoflurane | Abbot | B506 | |
| Isopentane | Fluka | 59070 | |
| Ketamine | Inresa Arzneimittel GmbH | ||
| Laser Doppler | Perimed | PF 5010 LDPM, Periflux System 5000 | |
| Laser Doppler probe | Perimed | 91-00123 | |
| Phosphate Buffered Saline pH: 7.4 | Apotheke Innestadt Uni Munchen | P32799 | |
| Recovery chamber | Mediheat | ||
| Roti-Histokit mounting medium | Roth | 6638.1 | |
| Saline solution | Braun | 131321 | |
| Scalpel | Feather | 02.001.30.011 | |
| Silicon-coated filaments | Doccol | 602112PK5Re | |
| Stereomicropscope | Leica | M80 | |
| Superfrost Plus Slides | Thermo Scientific | J1800AMNZ | |
| Vannas Spring Scissors | FST | 15000-00 | |
| Xylacine | Albrecht |
References
- Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M.
- O'Collins, V. E., et al. 1,026 experimental treatments in acute stroke. Annals of Neurology. 59 (3), 467-477 (2006).
- Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques. Journal of Neuroscience Methods. 139 (2), 203-207 (2004).
- Zhang, Z., et al. A new rat model of thrombotic focal cerebral ischemia. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 17 (2), 123-135 (1997).
- Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
- Carmichael, S. T. Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose. NeuroRx. 2 (3), 396-409 (2005).
- Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (47), e2423 (2011).
- Dirnagl, U., et al. A concerted appeal for international cooperation in preclinical stroke research. Stroke. 44 (6), 1754-1760 (2013).
- McNutt, M.
- Llovera, G., et al. Results of a preclinical randomized controlled multicenter trial (pRCT): Anti-CD49d treatment for acute brain ischemia. Science Translational Medicine. 7 (299), (2015).
- Llovera, G., Liesz, A. The next step in translational research: lessons learned from the first preclinical randomized controlled trial. Journal of Neurochemistry. 139, Suppl 2 271-279 (2016).
- Swanson, G. M., Satariano, E. R., Satariano, W. A., Threatt, B. A. Racial differences in the early detection of breast cancer in metropolitan Detroit, 1978 to 1987. Cancer. 66 (6), 1297-1301 (1990).
- Lourbopoulos, A., et al. Inadequate food and water intake determine mortality following stroke in mice. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 37 (6), 2084-2097 (2017).
- Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse. Neurological Research. 19 (6), 641-648 (1997).
- Jackman, K., Kunz, A., Iadecola, C. Modeling focal cerebral ischemia in vivo. Methods in Molecular Biology. 793, 195-209 (2011).
- Kitano, H., Kirsch, J. R., Hurn, P. D., Murphy, S. J. Inhalational anesthetics as neuroprotectants or chemical preconditioning agents in ischemic brain. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 27 (6), 1108-1128 (2007).
- Rousselet, E., Kriz, J., Seidah, N. G. Mouse model of intraluminal MCAO: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (69), e4038 (2012).
- Rha, J. H., Saver, J. L. The impact of recanalization on ischemic stroke outcome: a meta-analysis. Stroke. 38 (3), 967-973 (2007).
- Liu, J., et al. Transient filament occlusion of the middle cerebral artery in rats: does the reperfusion method matter 24 hours after perfusion. BMC Neuroscience. 13, 154 (2012).
- Sommer, C. J. Ischemic stroke: experimental models and reality. Acta Neuropathologica. 133 (2), 245-261 (2017).
- Jones, B. J., Roberts, D. J. A rotarod suitable for quantitative measurements of motor incoordination in naive mice. Naunyn-Schmiedebergs Archiv für Experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 259 (2), 211 (1968).
- Bouet, V., et al. The adhesive removal test: a sensitive method to assess sensorimotor deficits in mice. Nature Protocols. 4 (10), 1560-1564 (2009).
- Zhang, L., et al. A test for detecting long-term sensorimotor dysfunction in the mouse after focal cerebral ischemia. Journal of Neuroscience Methods. 117 (2), 207-214 (2002).
- Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury. Neuropharmacology. 39 (5), 777-787 (2000).
- Roth, S., Yang, J., Cramer, J., Malik, R., Liesz, A. Detection of cytokine-induced sickness behavior after ischemic stroke by an optimized behavioral assessment battery. Brain, Behavior, and Immunity. 91, 668-672 (2021).
