هذا الفيديو يوضح كل جبل المناعية ، وهي الطريقة التي نمط التعبير المكاني والزماني للمستضد يمكن تصور افراخ الدجاج في الشباب. وقدم أصلا من قبل هذه الطريقة ودود جين Jessell توم.
Abstract
الجنين الفرخ هو أداة قيمة في دراسة التطور الجنيني المبكر. شفافيته ، وسهولة الوصول وسهولة التلاعب ، وجعلها أداة مثالية لدراسة التعبير الأضداد في تطوير الدماغ ، والأنبوب العصبي والجسيدة. هذا الفيديو يوضح الخطوات المختلفة في تلطيخ الأضداد كلها يشن باستخدام الأجسام المضادة الثانوية HRP مترافق ؛ أولا ، يتم تشريح الجنين من بويضة والثابتة في بارافورمالدهيد. الثاني ، هو البيروكسيداز الذاتية المعطل ، ثم يتعرض الجنين إلى جسم الابتدائي. يغسل بعد عدة ، وحضنت الجنين مع الأجسام المضادة الثانوية مترافق لHRP. وكشف النشاط البيروكسيداز باستخدام التفاعل مع الركيزة diaminobenzidine. أخيرا ، يتم إصلاح الجنين ومعالجتها للتصوير الفوتوغرافي وsectioning. ميزة هذه الطريقة على استخدام الاجسام المضادة فلوري هو أنه يمكن معالجة الأجنة لsectioning الشمع ، مما يتيح للدراسة المواقع مستضد في المقطع العرضي. وقدم أصلا من قبل هذا الأسلوب دود جين وتوم Jessell<sup> 1</sup>.
Protocol
أولا تخطيطي لمحة عامة : هذا الفيديو يوضح الخطوات المختلفة في جبل المناعية كلها في جنين الفرخ. الأول ، هو ثابت في جنين PFA [IHC1]. إذن ، هو مروي الذاتية النشاط البيروكسيداز [IHC2]. ومن ثم حضنت الجنين في جسم الأولية [IHC3]. يغسل بعد عدة ، وحضنت في…
Discussion
هذا الفيديو يوضح الخطوات المختلفة في أداء كامل للأجسام المضادة في جبل تلطيخ افراخ الدجاج الشباب. ويستخدم هذا البروتوكول أساسا لتوصيف المكاني والزماني للرواية في الأضداد 2،3 الفرخ ، فضلا عن استخدام علامات مستضدي المعروفة لتحديد التشوهات الجنينية التالية اهانة…
Acknowledgements
تم الحصول على أجسام مضادة وحيدة النسيلة (15.3B9 ، PAX7) التي طورتها (دود ، TM Jessell وكواكامي ألف) من البنك التنموي ورم هجين الدراسات المتقدمة تحت رعاية معاهد الصحة القومية والحفاظ عليها من جامعة أيوا ، قسم العلوم البيولوجية ، ولاية ايوا. موانئ دبي هي المستفيدة من جائزة روث 1F32 – 01A1 كيرشتاين DA021977 من المعهد الوطني لتعاطي المخدرات. وأيد هذا العمل من قبل مؤسسة مارغريت Alkek M. إلى RHF.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
Eggs
Charles River Laboratories
Premium Fertile
Fertilized, HH4 (16 hr)
Stereomicroscope
Microscope
Leica Microsystems
MZ9.5 or similar
Marsh Automatic Incubator
Outro
Lyon
RX
Curved Forceps (1)
Tool
Electron Microscopy Sciences
72991-4C
Forceps (2)
Tool
Fine Science Tools
11002-13
Fine scissors
Tool
Fine Science Tools
14161-10
Plastic dishes
Tool
Falcon
353001
Rubber Bulb
Tool
Electron Microscopy Sciences
70980
Pasteur Capillary Pipette
Tool
Electron Microscopy Sciences
70950-12
round edge under flame
Microdissecting knife
Tool
Fine Science Tools
10056-12
Use to cut embryo from surrounding membranes following fixation
Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base
Reagent
Dow Corning
0001986475
Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C
16% PFA
Reagent
Electron Microscopy Sciences
15710
30% H2O2
Reagent
Sigma
H1009
BSA
Reagent
Sigma
A3803
NGS
Reagent
Jackson Immuno
005-000-121
Primary Antibodies
Reagent
Developmental studies Hybridoma Bank
4G11, 15.3B9, PAX7
For these antibodies, investgators used mouse donnors
Peroxidase conjugated-Goat Anti-Mouse IgG (H+L)
Reagent
Jackson Immuno
115-035-003
3,3’-diaminobenzidine tetrahydrochloride
Reagent
Pierce
34001
Store at -20; Allow bottle to warm to RT before use.