改善されたパッチクランプ記録のための圧力 - 研磨ピペット
Summary
これは、ガラスマイクロピペットの形状を変更するためのガイドです。特に、熱や空気圧を使用してテーパーが低いピペットの抵抗につながる、先端の開口部を増やすことなく広げている。これは、小さな細胞の低ノイズ記録を取得することが重要ですが、多くのアプリケーションで有用です。
Abstract
圧力研磨は、パッチクランプ記録用ガラスピペットを整形するための方法です。我々は、最初に小さな（<3 m）のニューロン細胞体から記録に適したピペットを作製するためにこの方法を開発した。基本的なプリンシパルは、ガラス吹きと類似しており、従来のマイクロピペットプラーが作成したパッチピペットの形状を変更するには、空気の圧力と熱を兼ね備えています。それは、いわゆるソフト（ソーダ石灰）とハード（ホウケイ酸）ガラスに適用することができます。一般的に言えば、圧力の研磨は、先端開口部（グッドマンとLockery、2000）の直径を減少させることなく25％ピペット抵抗を減らすことができます。それはガラスのほぼすべてのタイプに適用され、高圧バルブとマイクロフォージへのフィッティングの添加のみを必要とすることができます。この手法は、超小型の細胞（<5 m）からの録音に必須であり、またピペットの抵抗を最小限に抑えることで、シングルチャンネルの記録を向上させることができます。鈍形の穿孔のための利用可能な大規模な膜のブレブのこの先端形状の結果以降も穿孔、パッチクランプ記録するのに便利です。
Protocol
Discussion
私たちは、もともとCの 2〜3μmの神経細胞からパッチクランプ記録用ピペットを有用にするためにこの方法を開発エレガンス 1。それは、グッドマンの研究室で日常的に使用しています。我々は小さなCから録音用だけでなく、圧力、研磨ピペット線虫の神経細胞だけでなく、アフリカツメガエルの卵母細胞で発現するイオンチャネルのmacropatchとシングルチャネル記録を得る…
Acknowledgements
圧力研磨技術は、SRのLockeryと共同で開発されました。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass Capillaries | Consumable | Sutter Instruments | BF150-85-10 (or similar) | The method works with any type of capillary except those made from quartz. However, we recommend using capillaries with a filament. |
| Inverted Microscope | Microscope | Leica | DM IL (or similar) | Any simple inverted microscope will do. However, it is essential to have sufficient magnification to see pipettes during polishing. We use a 100x metallurgical lens with a long working distance for this purpose. |
| Microforge Kit | Tool | ALA Science | CPM-2 | Supplies polishing coil, controller and foot pedal. |
| Air pressure source | Tool | ALA Science | PR-60 | Accessory for providing high pressure, includes a suitable valve. Alternatively, compressed air from the building can be used together with a filter/regulator (set to 40 PSI) and a 4-way valve (see below) |
| 4-way valve | Tool | Cole-Parmer | A-98150-01 | Fittings will be needed to couple valve to tubing |
| Pipette Holder with Luer Connector | Tool | World Precision Instruments | MPH-6S20 | Use a male luer-to-barb fitting to connect pipette holder to high-pressure tubing |
| Tygon® tubing | Tool | Cole-Parmer | 06408-62 | Use this tubing to connect pipette holder to 4-way valve |
Referências
- Goodman, M. B., Lockery, S. R. Pressure polishing: a method for re-shaping patch pipettes during fire polishing. . J Neurosci Methods. 100, 13-15 (2000).
