Light Spot Assay: een methode om drosophila-fototactisch gedrag te onderzoeken

- Begin met het selecteren van een derde instar larve, de grootste van de larvale vormen, uit het kweekmedium en was het met water om voedsel te verwijderen. Omdat de larvale ogen, of Bolwig-organen, zich in de bovenkant van de larve bevinden, plaatst u de larve in het midden van een agarplaat met de lichtbron boven het dier. Zet het kamerlicht uit en laat de larve wennen aan het donker.

Omdat de larve nauwelijks detecteerbaar is in een lichtvlek gemaakt door zichtbaar licht, schakelt u infrarood LED-lampjes in om het dier voor de camera te verlichten. Wacht tot het dier recht begint te kruipen om zijn pad te bepalen. En draai vervolgens de plaat zodat de larve direct naar de lichtvlek kruipt. Registreer het dier dat in het licht kruipt en vervolgens weg van de lichtvlek. Deze lichtvermijdingstactiek helpt larven roofdieren te vermijden door in voedsel te graven.

In het volgende voorbeeld zullen we de lichtvlektest uitvoeren om het vermogen van verschillende genetische stammen van Drosophila-larven om aan licht te ontsnappen te testen.

- Voordat u de larve in de beeldvormingsopstelling introduceert, krijgt u een korte video van de lichtpositie en noemt u de ongefilterde controleachtergrondvideo "lightarea1". Plaats het filter terug op de cameralens en zet een licht ver van het experimentele apparaat op een zo laag mogelijke stand aan, terwijl de larven nog steeds duidelijk kunnen worden waargenomen. Gebruik een lepel om enkele larven uit het kweekmedium te verwijderen en selecteer voorzichtig een derde instar larve.

Was de larve in gedestilleerd water en plaats de larve in het midden van de agarplaat. Verwijder voorzichtig overtollig water van de larve en schakel het kamerlicht uit. Laat de larve twee minuten acclimatiseren in de donkere omgeving voordat u het infrarood LED-licht inschakelt. Het volgende lichtvermijdingsgedragsexperiment moet in het donker worden uitgevoerd. Voor het gemak van demonstratie filmden we in het felle licht.

Borstel de larve voorzichtig naar het midden van de plaat. Wanneer de larve recht begint te kruipen, draait u de plaat om de larve naar de lichtvlek te laten gaan. Klik op Vastleggen, Instellen en Video-opname om het opslagpad te selecteren. En klik op Opname starten om op te nemen. Laat de lava naar binnen kruipen, voer in en verlaat de lichtvlek totdat deze bijna uit het gezichtsveld is en klik vervolgens op Opname stoppen.

Verplaats het filter uit de buurt van de camera en maak een korte video van de positie van de lichtvlek. Noem het bericht vervolgens een ongefilterde video, "lightarea2", en vergelijk deze video met de "lightarea1" video om ervoor te zorgen dat de positie van de lichtvlek niet wordt gewijzigd.