Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Comece selecionando uma terceira larva instar, a maior das formas larvas, do meio cultural, e lave-a com água para remover qualquer alimento. Desde que os olhos larvais, ou órgãos de Bolwig, estão localizados na parte superior da larva, coloque a larva no centro de uma placa de ágar com a fonte de luz acima do animal.
Como a larva mal é detectável em um ponto de luz feito por luz visível, ligue as luzes led infravermelhas para iluminar o animal para a câmera. Espere até que o animal comece a rastejar direto para controlar seu caminho.
No exemplo a seguir, realizaremos o ensaio de ponto de luz para testar a capacidade de diferentes cepas genéticas de larvas de Drosophila para escapar da luz.
- Antes de introduzir a larva na configuração de imagem, adquira um pequeno vídeo da posição de luz e nomeie o vídeo de fundo de controle não filtrado de "lightarea1". Coloque o filtro de volta na lente da câmera e ligue uma luz longe do dispositivo experimental no mais baixo possível, permitindo que as larvas sejam claramente observadas. Use uma colher para remover algumas larvas do meio de cultura, e selecione suavemente um terço em larvastar.
Lave a larva em água destilada e coloque a larva no centro da placa de ágar. Remova suavemente qualquer excesso de água da larva e desligue a luz do quarto. Deixe a larva se aclimatar por dois minutos no ambiente escuro antes de acender a luz led infravermelha.
Escove suavemente a larva para o centro da placa. Quando a larva começar a rastejar em linha reta, gire a placa para fazer a larva ir em direção ao ponto de luz. Clique em Capturar, Configurar e Capturar vídeo para selecionar o caminho de salvamento. E clique em Iniciar gravação para gravar. Deixe a lava rastejar em direção, entrar e deixar o ponto de luz até que esteja quase fora do campo de visão, em seguida, clique em Parar de gravar.
Mova o filtro para longe da câmera e adquira um vídeo curto da posição do ponto de luz. Em seguida, nomeie o post como um vídeo não filtrado, "lightarea2", e compare este vídeo com o vídeo "lightarea1" para garantir que a posição do ponto de luz não seja alterada.
