Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Commencez par un réservoir d’accouplement, un réservoir avec un insert amovible qui permet aux œufs de tomber à travers. Ajouter deux poissons mâles et trois femelles adultes à un réservoir d’accouplement divisé dans la soirée avant la collecte d’embryons pour s’acclimater les uns aux autres pendant la nuit.
Le lendemain matin, transférez le poisson dans un nouveau réservoir d’accouplement contenant de l’eau du système et retirez le séparateur. Attendez de 15 à 30 minutes pour donner au poisson le temps de s’accoupler et de frayer.
Maintenant, recueillez les embryons et rangez-les dans une boîte de Pétri contenant le milieu embryonnaire de Hank. Cultivez-les à 28,5 degrés Celsius tout au long du protocole. Examinez la morphologie des embryons au microscope disséquant.
Vous observerez plusieurs caractéristiques de développement. Le clivage du blastodisc donne lieu à plusieurs cellules. Le blastoderm prend la forme d’une tasse inversée au-dessus de la cellule jaune. Les segments paraxial mesoderm se développent sur la partie dorsale de l’embryon et ainsi de suite.
Au-delà de 24 heures après la fécondation, il suffit de trier les embryons par la longueur totale du corps. Dans le protocole de l’exemple, nous allons mettre en place l’accouplement des poissons transgéniques journaliste mCherry et trier les embryons résultants.
- Pour commencer, les embryons de culture jusqu’à l’âge de trois mois, c’est-à-dire la maturité reproductrice. Séparer deux mâles adultes et trois poissons femelles de la souche désirée en réservoirs d’accouplement divisés d’eau du système frais le soir précédant la collecte des embryons. Le lendemain matin, après l’allumement des lumières, retirer le séparateur et permettre au poisson de s’accoupler naturellement jusqu’à ce que les embryons soient observés au fond du réservoir.
Recueillir les embryons à intervalles de 30 minutes et séparer les boîtes de Pétri du milieu embryonnaire jusqu’à ce que le nombre désiré soit recueilli. Pour mettre en scène les embryons, les culture en groupes de 50 à 75 par boîte de Pétri de 10 centimètres afin de promouvoir un calendrier de développement constant de tous les embryons. Puis gardez les plaques à 28,5 degrés Celsius.
Mesurez l’âge de l’embryon à l’aide du nombre de somites après segmentation jusqu’à environ 24 heures après la fécondation, ou HPF, et séparez les embryons en fonction de l’âge de développement.
