Modèle murin de la cicatrisation

L’objectif global de cette procédure est de créer une plaie, qui est attelée, pour prévenir la contraction et favoriser l’épithélialisation, la prolifération de la semelle et l’angiogenèse. Ceci est accompli en préparant d’abord le dos et en créant deux plaies excisionnelles de pleine épaisseur de chaque côté de la ligne médiane. Ensuite, une attelle est placée sur la plaie et suturée en place.

La plaie est ensuite mesurée et des traitements sont appliqués. Enfin, un pansement occlusif est placé sur la plaie et la souris est laissée récupérer. En fin de compte, le modèle de cicatrisation excisionnelle cutanée des plaies est utilisé pour évaluer la plaie, l’épithélialisation et les processus associés, y compris la prolifération et l’angiogenèse.

Le principal avantage de cette technique par rapport aux autres méthodes est d’éviter la contraction de la plaie. Cela favorise la prolifération de l’épithélisation et l’angiogenèse, ce qui se rapproche davantage du processus de cicatrisation des plaies. Chez l’homme, cette méthode est particulièrement utile pour évaluer l’efficacité des composés thérapeutiques, et comme chaque souris sert de son propre contrôle, elle minimise le nombre d’animaux nécessaires à une étude.

Commencez par préparer les attelles et les pansements occlusifs pour fabriquer une attelle. Décrivez d’abord un cercle de 10 millimètres sur une feuille de silicone, puis utilisez des ciseaux ou un poinçon de biopsie pour créer des disques en silicone. Ensuite, centrez un poinçon de biopsie de cinq millimètres au milieu du disque de 10 millimètres et appuyez fermement pour créer un anneau en forme de beignet qui sera utilisé comme attelle.

Créez des pansements circulaires de la même taille à l’aide d’un pansement occlusif transparent tel qu’un pansement de site d’opération. Pour commencer, confirmez la profondeur appropriée de l’anesthésie chez une souris anesthésiée. Après avoir enlevé tous les poils de la zone chirurgicale, nettoyez la peau avec des applications répétées de bétadine et d’alcool.

Lorsque vous êtes prêt, utilisez un poinçon de biopsie stérile de quatre millimètres pour tracer le contour de deux motifs circulaires de chaque côté de la ligne médiane de la souris au niveau de l’épaule. Ensuite, utilisez une pince dentelée pour soulever la peau au milieu du contour et des ciseaux à iris pour créer la plaie. Assurez-vous de couper à travers le tissu sous-cutané, y compris le panus osis.

Exciser le tissu des deux côtés. Pour révéler deux plaies circulaires. Retirez le revêtement protecteur en plastique de chaque côté de l’attelle en silicone et appliquez de l’adhésif cyanoacrylate sur un côté.

Centrez l’attelle sur la plaie et suturez-la en place avec six sutures en nylon interrompues. Répétez le processus d’attelle sur l’autre plaie. À ce stade, un composé thérapeutique peut être appliqué sur une plaie tout en utilisant l’autre.

Pour le contrôle d’un véhicule, placez une règle sous les attelles et prenez une photomicrographie. Couvrez la plaie avec l’un des morceaux circulaires de pansement préparés précédemment. Après avoir administré un analgésique, laissez l’animal se rétablir dans une cage chauffée.

Les animaux sont surveillés deux fois par jour pour détecter des manifestations de douleur et de perte de poids. Pour mesurer la plaie, anesthésez l’animal comme indiqué précédemment et décollez doucement le pansement occlusif à l’aide d’une pince. Utilisez un pied à coulisse chirurgical pour mesurer le diamètre de la plaie en plusieurs points afin d’obtenir une moyenne et de prendre une photomicrographie pour référence future.

À ce moment-là, l’animal peut être évalué pour la perfusion sanguine. À l’aide d’un imageur laser Doppler, appliquez un pansement occlusif propre et transparent sur la plaie et gardez l’animal au chaud jusqu’à ce qu’il soit complètement rétabli. Il est important de noter que si les attelles ne sont pas correctement fixées, la plaie se contractera facilement après l’euthanasie par surdosage d’anesthésique, utilisez des pinces et une lame de scalpel pour retirer les sutures et retirez soigneusement l’attelle des plaies.

À l’aide de ciseaux à iris, créez une excision large et complète autour et sous la zone de la plaie. Une fois retiré, fixez le tissu en suivant les procédures standard. La coloration à l’hématine et à l’éosine peut être utilisée pour visualiser la structure de la plaie et l’espace épithélial.

De plus, la néovascularisation peut être évaluée par des analyses immunohistochimiques pour déterminer le nombre de capillaires. Une courbe de fermeture de la plaie est déterminée en calculant le diamètre moyen de la plaie et en exprimant les résultats en pourcentage. Dans cet exemple, le composé thérapeutique a considérablement accéléré la fermeture de la plaie par rapport aux témoins.

Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 30 minutes si elle est exécutée correctement. Lors de cette procédure, il est important d’attacher solidement l’attelle avec des sutures également placées pour maintenir la cohérence entre les expériences.