פרוטוקול זה מדגים כיצד לנתח<em> תסיסנית</em> הזחלים לקראת אימונוהיסטוכימיה ו / או הדמיה של צומת neuromuscular.
Abstract
<em> תסיסנית</em> Neuromuscular צומת (NMJ) היא מערכת מודל הוקמה המשמשים במחקר של פיתוח הפלסטיות הסינפטית ו. השימוש הנרחב של<em> תסיסנית</em> מנוע מערכת נובע הנגישות הגבוהה שלו. זה יכול להיות מנותח עם רזולוציה של תא בודד. ישנם 30 שרירים לכל hemisegment אשר הסדר בתוך הקיר הגוף היקפי ידועים. סך של 35 נוירונים מנוע לצרף את השרירים האלה בדפוס כי יש איכות גבוהה. באמצעות הביולוגיה והגנטיקה המולקולרית, אפשר ליצור חיות טרנסגניות או מוטציות. לאחר מכן, אפשר ללמוד את ההשלכות על התפתחות המורפולוגיה והתפקוד של NMJ. כדי לגשת NMJ למחקר, יש צורך בזהירות לנתח כל הזחל. במאמר זה אנו מדגימים כיצד לנתח כהלכה<em> תסיסנית</em> הזחלים למחקר של NMJ על ידי הסרת כל האיברים הפנימיים תוך השארת הגוף קיר שלם. טכניקה זו מתאימה להכנת זחלים הדמיה, אימונוהיסטוכימיה, או electrophysiology.
Protocol
לפני שתתחיל תרבויות כל צריך להיות גדל ב 25 ° C. HL3.1 חיץ לנתיחה עשוי להיות מוכן מראש. קחו aliquot 50 מ"ל של HL3.1 ולשמור על הקרח. הכן 15 מ"ל של 3.5% פורמלדהיד טרי HL3.1. שמור את ז…
Discussion
הטכניקה לנתיחה הפגינו וידאו זה יכול לשמש כדי להכין את הזחלים תסיסנית עבור מגוון רחב של טכניקות ניסוי. אם תגי חלבון פלואורסצנטי נוכחים, הזחלים יכול להיות מותקן הדמיה מיד. אחרת, immunostaining יכול להתבצע על מנת לסמן תאים סינפטי ספציפי. בנוסף, electrophysiology יכול בקלות להתבצע ?…
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.