هذا البروتوكول يوضح كيفية تشريح<em> ذبابة الفاكهة</em> اليرقات في إعداد و / أو التصوير المناعية من مفترق الطرق العصبية والعضلية.
Abstract
و<em> ذبابة الفاكهة</em> الوصل العصبي العضلي (NMJ) هو نظام يستخدم نموذج المتبع لدراسة تطوير واللدونة متشابك. استخدام على نطاق واسع<em> ذبابة الفاكهة</em> محرك النظام هو نتيجة لسهولة الوصول إليها عالية. ويمكن تحليل ذلك مع قرار وحيد الخلية. هناك 30 في عضلات hemisegment الذين الترتيب داخل جدار الجسم هامشية معروفة. مجموعه من الخلايا العصبية الحركية 35 نعلق على هذه العضلات في النمط الذي الدقة العالية. استخدام البيولوجيا الجزيئية وعلم الوراثة ، ويمكن للمرء أن خلق حيوانات معدلة وراثيا أو المسوخ. ثم ، يمكن للمرء أن دراسة الآثار التنموية على التشكل وظيفة NMJ. من أجل الوصول إلى NMJ للدراسة ، فمن الضروري أن يشرح بعناية كل يرقة. نحن في هذه المقالة شرح كيفية تشريح صحيح<em> ذبابة الفاكهة</em> اليرقات لدراسة NMJ عن طريق إزالة جميع الأعضاء الداخلية في حين ترك جدار الجسم سليما. هذا الأسلوب هو مناسب لاعداد اليرقات التصوير ، والمناعية ، أو الكهربية.
Protocol
قبل أن تبدأ وينبغي أن تزرع في كل الثقافات 25 درجة مئوية. قد تكون على استعداد HL3.1 العازلة تشريح مقدما. اتخاذ قسامة 50 مل من HL3.1 وابقائه على الجليد. تحضير 15 مل من فورمالد…
Discussion
ويمكن استخدام هذه التقنية أظهر تشريح في هذا الفيديو لإعداد يرقات ذبابة الفاكهة لمجموعة متنوعة من التقنيات التجريبية. إذا به بروتين فلوري موجودة ، ويمكن تحميل واليرقات والتقط على الفور. خلاف ذلك ، يمكن أن يؤديها من أجل immunostaining علامة مقصورات متشابك محددة. بالإضاف…
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.