תסיסנית הזחל Dissection NMJ
Summary
פרוטוקול זה מדגים כיצד לנתח<em> תסיסנית</em> הזחלים לקראת אימונוהיסטוכימיה ו / או הדמיה של צומת neuromuscular.
Abstract
<em> תסיסנית</em> Neuromuscular צומת (NMJ) היא מערכת מודל הוקמה המשמשים במחקר של פיתוח הפלסטיות הסינפטית ו. השימוש הנרחב של<em> תסיסנית</em> מנוע מערכת נובע הנגישות הגבוהה שלו. זה יכול להיות מנותח עם רזולוציה של תא בודד. ישנם 30 שרירים לכל hemisegment אשר הסדר בתוך הקיר הגוף היקפי ידועים. סך של 35 נוירונים מנוע לצרף את השרירים האלה בדפוס כי יש איכות גבוהה. באמצעות הביולוגיה והגנטיקה המולקולרית, אפשר ליצור חיות טרנסגניות או מוטציות. לאחר מכן, אפשר ללמוד את ההשלכות על התפתחות המורפולוגיה והתפקוד של NMJ. כדי לגשת NMJ למחקר, יש צורך בזהירות לנתח כל הזחל. במאמר זה אנו מדגימים כיצד לנתח כהלכה<em> תסיסנית</em> הזחלים למחקר של NMJ על ידי הסרת כל האיברים הפנימיים תוך השארת הגוף קיר שלם. טכניקה זו מתאימה להכנת זחלים הדמיה, אימונוהיסטוכימיה, או electrophysiology.
Protocol
Discussion
הטכניקה לנתיחה הפגינו וידאו זה יכול לשמש כדי להכין את הזחלים תסיסנית עבור מגוון רחב של טכניקות ניסוי. אם תגי חלבון פלואורסצנטי נוכחים, הזחלים יכול להיות מותקן הדמיה מיד. אחרת, immunostaining יכול להתבצע על מנת לסמן תאים סינפטי ספציפי. בנוסף, electrophysiology יכול בקלות להתבצע ?…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss | 000000-1063-181 | ||
| 3mm Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools Inc. | 15000-0 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | Long forceps | |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | Short forceps | |
| SylGard 182 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning Corp. | 3097358-1004 | Used to make dissection plates | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich Inc. | 252549-25ML | ||
| Stainless Steel Minutien Pins -0.1 MM Diameter | Fine Science Tools Inc. | 26002-10 |
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.
References
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Vactor, D. V., Sink, H., Fambrough, D., Tsoo, R., Goodman, C. S. Genes that control neuromuscular specificity in Drosophila. Cell. , 73-1137 (1993).
- Feng, . A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae. J Neurogenet. 18 (2), 377-402 (2004).
