Här beskriver vi en hjärt kirurgiskt ingrepp för att implantat vävnadstekniska i atrioventrikulärt (AV)-spår av en vuxen Lewis råtta.
Abstract
Gnagare kirurgi är ofta en viktig komponent i att bedöma nyttan av tekniska vävnader. Ett brett utbud av kirurgiska ingrepp kan utföras gemensamt laboratorium råttor eller möss och dessa ganska ofta fungera som ett mellansteg mellan bänkbaserade experiment och stora djurförsök eller försök på människa. Med tanke på att gnagare är en etablerad, kostnadseffektiv, och fysiologiskt relevant modellsystem för att testa nya kombinationer av byggnadsställningar material och celler, de är särskilt väl lämpade för kardiovaskulära studier tissue engineering. För närvarande beskriver vi en öppen hjärt-kirurgiskt ingrepp för implantat vävnadstekniska innehåller myogenic stamceller i atrioventrikulärt (AV) spår av en råtta hjärta. Dessa implantat är avsedda att skapa en elektrisk ledning mellan höger förmak och höger kammare med det slutliga målet att ge en alternativ behandling med konventionell pacemaker implantation hos barn med komplett hjärtblock [1]. Den vävnadstekniska är implanteras i AV-spår med hjälp av en torakotomi. För våra syften, Lewis råttor är bedövad och invasivt ventilerade för att upprätthålla CPAP under sterila kirurgiska ingreppet. Den metod som till hjärtat utförs av en rätt torakotomi genom en anterolaterala snitt vid 5<sup> Th</sup> Interkostalrummet. Vävnaden konstruera är fast i AV-spåret med en enda 7-0 Prolene sutur och placeras mellan höger kammare och förmak vid ventrala delen av hjärtat. Den epikardiet är delvis bort för att möjliggöra direkt kontakt mellan mottagarens hjärtmuskelceller och de som finns i vävnadstekniska. Efter implantation är bröstväggen stängdes i lager är alla pneumothorax evakueras, och djuret extubated och behandlas med smärtstillande.
Protocol
Del 1: Induktion av allmän anestesi En 200-250 g Lewis råttan är sövda med 50 mg / kg ketamin och 4 mg / kg Xylazine injiceras med en 30 G nål i intraperitoneal hålighet. Den övre delen av buken och höger bröst klipps för att ta bort hår och snittet platsen rengöras med 70% etanol och därefter en povidon-jod aktuell antiseptisk lösning. Djuret är intuberade endotracheally med en 16 g intravenös kateter ansluten till ett litet djur andningsskydd (Harvard Apparatus). Andningsskyddet ä…
Discussion
För ett positivt resultat för det kirurgiska ingreppet är det viktigt att korrekt intuberas och invasivt ventilera djuret. Om råttan är helt enkelt lugnande preparat och tillåtas att spontant andas, kommer båda lungorna kollapsar oundvikligen medan bröstkorgen öppnas på grund av gemensamma lungsäck hos gnagare. Innan du stänger bröstet, behöver någon pneumothorax att vara helt elimineras och lungorna fullt utbyggt att minska atelektas. Annars kommer avvänjning från respirator och återhämtning misslyck…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta arbete stöds av forskningsanslag från National Institutes of Health (HL068915, HL088206) och bidrag till hjärtöverledning fonden vid barnsjukhuset Boston.
Sill, B., Alpatov, I. V., Pacak, C. A., Cowan, D. B. Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart. J. Vis. Exp. (28), e1139, doi:10.3791/1139 (2009).