Imagerie de la migration en direct des cellules gliales dans le disque Eye drosophile Imaginal
Summary
Nous décrivons ici un protocole visant à étudier la migration des cellules gliales dans le développement de l'œil de drosophile en utilisant l'analyse microscopique direct couplé à la GFP taggés cellules gliales.
Abstract
Les cellules gliales du vertébrés et invertébrés organismes doivent migrer vers des régions cibles finale afin de ensheath et de soutien des neurones associés. Bien que des progrès récents ont été faits pour décrire la migration en direct des cellules gliales dans l'aile de développement nymphal (1), les études de<em> Drosophile</em> Migration des cellules gliales ont généralement impliqués l'examen des tissus fixés. Analyse microscopique direct des cellules mobiles offre la possibilité d'examiner le comportement cellulaire tout au long du processus migratoire, y compris la détermination du taux de change et en direction de la croissance. Couplé à l'utilisation d'outils génétiques, imagerie en temps réel peut être utilisé pour déterminer les rôles plus précis pour des gènes spécifiques dans le processus de développement. Les travaux antérieurs de Silies<em> Et al.</em> (2) a décrit la migration des cellules gliales en provenance de la tige optique, une structure qui relie l'œil et le cerveau de développement, dans le disque imaginal des yeux dans les tissus fixés. Nous exposons ici un protocole pour examiner la migration en direct des cellules gliales dans le<em> Drosophile</emDisque oeil> imaginale. Nous profitons d'une ligne de drosophile qui exprime la GFP dans glie en développement de suivre la progression des cellules gliales de type sauvage et chez les animaux mutants.
Protocol
Discussion
Dans ce protocole, nous décrivons l'observation de la migration des cellules gliales dans le disque imaginal des yeux en utilisant la microscopie vivre. Dans notre exemple de type sauvage (figure 1 après JC), nous avons utilisé un marqueur GFP nucléaires d'observer le mouvement des cellules gliales dans le disque les yeux au cours d'une heure. Dans un mutant d'un gène candidat requis pour la migration des cellules gliales actuellement à l'étude dans notre laboratoire, nous avons obser…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Patrick Cafferty est soutenu par une bourse de recherche postdoctorale de la Société canadienne de la sclérose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. Genetics. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
