Drosophila Göz hayali Disk Glial Hücre Göç Canlı Görüntüleme
Summary
Burada, glial hücreler göç GFP etiketli glial hücreler ile eşleştirilmiş canlı mikroskobik analizi ile gelişmekte olan Drosophila göz içine incelemek için bir protokol açıklar.
Abstract
Omurgalı ve omurgasız organizmaların hem de glial hücreleri ensheath için nihai hedef bölgelere göç ve ilişkili nöronlar desteği gerekir. Son ilerleme gelişmekte olan pupa kanat (1), çalışmaları glial hücreler canlı göç tanımlamak için yapılmış olsa da<em> Drosophila</em> Glial hücre göçü genellikle sabit dokusunun incelenmesi yer var. Canlı hareketli hücrelerin mikroskobik inceleme, oranı ve büyüme yönünde değişiklikler belirlenmesi de dahil olmak üzere göçmen süreci boyunca hücresel davranışlarını incelemek için yeteneği sunar. Genetik araçlarının kullanımı ile eşleştirilmiş, canlı görüntüleme, kalkınma sürecinde belirli genler için daha hassas rollerini belirlemek için kullanılabilir. Silies tarafından Önceki çalışma<em> Ve ark.</em> (2), sabit dokusunda göz hayali disk, optik sapı, gelişmekte olan beyin ve göz bağlayan bir yapı kaynaklanan göç glia tanımladı. Burada, glial hücrelerin canlı göç incelenmesi için bir protokol taslağını<em> Drosophila</em> Göz hayali disk. Biz gelişmekte olan glia yabani tip ve mutant hayvanlar glial hücre ilerlemesini takip etmek, GFP ifade eden Drosophila hattı yararlanmak.
Protocol
Discussion
Bu protokol canlı mikroskopi kullanılarak göz hayali disk glial hücre göç gözlem açıklar. Vahşi tip örnek (Şekil 1 MS), bir saat boyunca göz disk glial hücre hareketi gözlemlemek için bir nükleer GFP işareti kullanılır. Şu anda bizim laboratuvarda çalışma kapsamında, glial hücre göçü için gerekli bir aday gen için bir mutant, biz (Şekil 1 EH) bir saatlik bir süre boyunca bir optik sapı içinde glial hücre çekirdeğinin durdurduklarını gözlemlenmiştir. Bizim stratejimiz il…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Patrick Cafferty Kanada Multipl Skleroz Derneği bir doktora sonrası burs tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. Genetics. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
