Drosophila 아이 Imaginal 디스크에 Glial 세포 이미징 마이 그 레이션 라이브
Summary
여기 GFP 태그 glial 세포와 결합하여 라이브 미세 분석을 사용하여 개발 Drosophila의 눈을 glial 세포의 마이 그 레이션을 검사하기 위해 프로토콜을 설명합니다.
Abstract
척추 및 무척추 동물 생물 모두 Glial 세포 ensheath하기 위해서는 최종 대상 지역으로 마이 그 레이션과 관련된 뉴런을 지원해야합니다. 최근 진행은 개발 pupal 날개 (1)의 연구에 glial 세포의 라이브 마이 그 레이션을 설명하기 위해 만든되었습니다 있지만<em> Drosophila</em> glial 세포 마이 그 레이션은 일반적으로 고정 조직 검사를 참여했습니다. 운동성이있는 세포의 라이브 현미경 분석의 속도와 성장 방향의 변경을 결정하는 포함하여 철새 과정을 통해 세포 행동을 검사하는 기능을 제공합니다. 유전자 도구의 사용과 결합하여, 라이브 영상은 개발 과정에서 특정 유전자에 대한 더 정확한 역할을 결정하는 데 사용할 수 있습니다. Silies로 이전 작업<em> 외.</em> (2) 고정 조직에서 눈을 imaginal 디스크로, 광 스토킹, 개발 안구와 두뇌를 연결하는 구조에서 발생하는 glia의 마이 그 레이션하는 작업을 설명하고 있습니다. 여기에 glial 세포의 라이브 마이 그 레이션을 조사를위한 프로토콜을 윤곽<em> Drosophila</em> 눈 imaginal 디스크. 우리는 야생 타입과 돌연변이 동물의 glial 세포의 진행에 따라 개발 glia에 GFP를 표현 Drosophila 라인을 활용.
Protocol
Discussion
이 프로토콜에서는 라이브 현미경을 사용하여 눈을 imaginal 디스크에 glial 세포 이주의 관찰을 설명합니다. 우리의 야생 유형 예를 들어 (그림 1 AD)에서, 우리는 한 시간의 과정을 통해 아이 디스크에 glial 세포의 움직임을 관찰하기 위해 핵 GFP 표지를 사용했습니다. 현재 저희 연구실에서 공부를 아래에 glial 세포 마이 그 레이션에 필요한 후보 유전자에 대한 돌연변이, 우리는 한 시간 동안 (?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
패트릭 카퍼티는 캐나다의 여러 경화증 협회에서 박사 친교에 의해 지원됩니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. Genetics. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
