ड्रोसोफिला आँखों Imaginal डिस्क में Glial सेल प्रवासन के इमेजिंग लाइव
Summary
यहाँ हम विकासशील ड्रोसोफिला रहते सूक्ष्म विश्लेषण GFP टैग glial कोशिकाओं के साथ रखा का उपयोग कर आँख में glial कोशिकाओं के प्रवास की जांच करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन.
Abstract
दोनों हड्डीवाला और invertebrate जीवों के Glial कोशिकाओं अंतिम लक्ष्य क्षेत्रों की ओर पलायन ensheath करने के लिए आदेश में जुड़े न्यूरॉन्स समर्थन. जबकि हाल ही में प्रगति के लिए विकासशील pupal विंग, (1) के अध्ययन में glial कोशिकाओं के लाइव माइग्रेशन का वर्णन किया गया है<em> ड्रोसोफिला</em> Glial सेल प्रवास आमतौर पर तय ऊतक की परीक्षा शामिल है. चलता – फिरता कोशिकाओं के लाइव सूक्ष्म विश्लेषण प्रवासी प्रक्रिया है, और विकास की दिशा में परिवर्तन की दर का निर्धारण सहित भर में सेलुलर व्यवहार की जांच करने की क्षमता प्रदान करता है. आनुवंशिक उपकरणों के उपयोग के साथ जोड़ा, जी इमेजिंग के लिए विकास की प्रक्रिया में विशेष जीन के लिए और अधिक सटीक भूमिकाओं का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. Silies द्वारा पिछला काम<em> एट अल.</em> (2) ऑप्टिक डंठल, एक संरचना है कि आँख और मस्तिष्क के विकास को जोड़ता से glia उद्भव के प्रवास निर्धारित ऊतकों में आंख imaginal डिस्क में वर्णित किया गया है. यहाँ हम में glial कोशिकाओं के लाइव माइग्रेशन की जांच के लिए एक प्रोटोकॉल की रूपरेखा<em> ड्रोसोफिला</em> आँख imaginal डिस्क. हम एक ड्रोसोफिला लाइन है कि विकासशील glia में GFP व्यक्त करने के लिए जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती पशुओं में glial सेल प्रगति का पालन के लाभ ले लो.
Protocol
Discussion
इस प्रोटोकॉल में हम आँख imaginal रहते माइक्रोस्कोपी का उपयोग डिस्क में glial सेल प्रवास के अवलोकन का वर्णन. हमारे जंगली प्रकार उदाहरण (1 आंकड़ा ई.) में, हम एक परमाणु GFP मार्कर का इस्तेमाल आँख डिस्क में एक घंटे क?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
पैट्रिक Cafferty कनाडा के मल्टीपल स्केलेरोसिस सोसायटी से एक postdoctoral फैलोशिप द्वारा समर्थित है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. Genetics. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
