Live avbildning av gliacellsmarkörer migration i Drosophila Eye Imaginal Disc
Summary
Här beskriver vi ett protokoll för att undersöka migration av gliaceller i utvecklingsländerna Drosophila ögat använder levande mikroskopisk analys paras ihop med GFP taggade gliaceller.
Abstract
Gliaceller av både ryggradsdjur och ryggradslösa organismer måste migrera till slutmålet på regioner i syfte att ensheath och stöd i samband nervceller. Även om de senaste framstegen har gjorts för att beskriva den levande migration av gliaceller i utvecklingsländerna PUPP-vingen (1), studier av<em> Drosophila</em> Gliacellsmarkörer migration har normalt inblandade granskning av fast vävnad. Live mikroskopisk analys av rörliga celler ger möjlighet att undersöka cellulära beteende under hela vandrande, inklusive att fastställa graden av och förändringar i riktning mot tillväxt. Paras ihop med användning av genetiska verktyg kan leva avbildning användas för att bestämma mer exakt roller för specifika gener i utvecklingsprocessen. Tidigare arbete med Silies<em> Et al.</em> (2) har beskrivit migration av Glia kommer från synnerven stjälk, en struktur som förbinder utveckla ögat och hjärnan, i ögat imaginal skivan i fast vävnad. Här redogör vi för ett protokoll för att undersöka livemigrering av gliaceller i<em> Drosophila</em> Öga imaginal skiva. Vi drar nytta av en Drosophila linje som uttrycker GFP utveckla Glia följa gliacellsmarkörer progression i vildtyp och muterade djur.
Protocol
Discussion
I detta protokoll beskriver vi observation av gliacellsmarkörer migration i ögat imaginal skiva med live-mikroskopi. I vårt vild typ exempel (figur 1 AD), använde vi en nukleär GFP markör för att följa gliacellsmarkörer rörelse i ögat skivan under loppet av en timme. I en mutant för en kandidat gen som krävs för gliacellsmarkörer migration närvarande utreder i vårt laboratorium, observerade vi en blockering av stödjeceller cellkärnor inom optisk stjälk under en timmes tid (figur 1 EH). Vår …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Patrick Cafferty stöds av ett postdoktorsstipendium från Multiple Sclerosis Society of Canada.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. Genetics. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
