حجم صغير (1 - 3L) الترشيح للعينات مياه البحر الساحلية
Summary
هذا الكتاب وثائق فيديو صغيرة (~ 1 L) ترشيح الكتلة الحيوية الميكروبية من عمود الماء.
Abstract
يبدأ سير العمل في جمع المياه البحرية الساحلية للمجتمع الميكروبية المصب ، ويحلل الغاز المغذيات والتتبع. مظاهرة اليوم للحصول على عينات ليالي جمعت من على متن سفينتى التشغيل جون ستريكلاند في مدخل Saanich. هذا الكتاب وثائق فيديو صغيرة (~ 1 L) ترشيح الكتلة الحيوية الميكروبية من عمود الماء. البروتوكول هو امتداد لأخذ العينات حجم كبير بروتوكول صفت في وقت سابق ، مع فارق واحد رئيسي : هنا ، لا يوجد أي خطوة قبل الترشيح ، بحيث يتم جمع كل الفئات حجم الكتلة الحيوية وصولا الى 0.22 ميكرون تصفية الوقف. جمع عينات من هذه الطريقة مثالية لتحليل الحمض النووي. خطوات انشاء ، والترشيح ، وتنظيف كل يستغرق حوالي 20-30 دقيقة. إذا به قد مضختين تمعجية وقت واحد ، لتتم تصفيته حتى 8 عينات في نفس الوقت. لمنع تشكيل بيوفيلم رحلات بين أخذ العينات ، يجب شطف جميع المعدات الترشيح مع حمض الهيدروكلوريك المخفف والمياه وتعقيمها منزوع الأيونات بعد الاستعمال مباشرة.
Protocol
Discussion
ومن الضروري أن يمسح أسفل المقاعد ومضخات بمنشفة مبللة بعد الاستخدام لإزالة أي آثار متبقية من المياه المالحة التي من شأنها أن خلاف ذلك تآكل المعدات. على الرغم من أن هذا الإجراء هو بسيط ، يمكن أن تكون واسعة شرط الوقت اعتمادا على تركيز الكتلة الحيوية أو الحطام في العينة ا…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نود أن نشكر المؤسسة الكندية للإبداع ، ومعارف كولومبيا البريطانية وصندوق التنمية الوطنية للعلوم والهندسة مجلس البحوث (NSERC) من كندا لدعم الدراسات الجارية على المناطق المنخفضة من الأوكسجين مياه المحيطات والمناطق الساحلية المفتوحة. كان مدعوما من قبل شعبة النهوض بالمرأة من الزمالات NSERC ، Killam ومؤسسة التمويل مركز تولا للتنوع وتطور الميكروبية.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Peristaltic pump | Masterflex (Cole Palmer) | 77913-20, 77200-62, 77200-04 | ||
| Tygon LFL tubing | Masterflex (Cole Palmer) | 06429-24 | For filtration apparatus | |
| Hose clamps | Cole Palmer | 0683204 | For filtration apparatus | |
| 1/4” x 3/16” pipe adaptors | Cole Palmer | 31702-20 | For filtration apparatus | |
| Polypropylene prefilter housing | ADVANTEC | 501200 | For filtration apparatus | |
| Metal luer fitting (Hose end to Male luer lock) | Cole Palmer | 31507-27 | For filtration apparatus | |
| 2“ Magnets | For filtration apparatus | |||
| 3 port carboy caps | For filtration apparatus | |||
| GV 0.22 μm STERIVIX filters | Millipore | SVGV01R5 | ||
| 47 mm diameter 2.7 μm GF/D filters | Whatman | 1823047 | ||
| Lysis buffer | 0.75 M sucrose, 40 mM EDTA, 50 mM Tris (pH 8.3) | |||
| 0.1 % HCl | For post-filtration rinse | |||
| Autoclaved water | For post-filtration rinse |
