ワクシニアウイルス感染とウイルスの遺伝子発現の時間的解析：その1
Summary
HeLa細胞と宿主とウイルスの遺伝子発現の解析のワクシニア感染のためのプロトコル。 3のパート1。
Abstract
家族の<em>ポックスウイルス科</em>感染細胞の細胞質中に独占的に複製するウイルスを含む大規模な二重鎖DNAで構成されています。のメンバー<em>オルトポックス</em>属インクルード天然痘、人間の天然痘、サル痘、およびワクシニア（VAC）の原因物質、ウイルスの家族の原型の一員。比較的大きな（〜200 KB）ワクシニアゲノムの中で、遺伝子の3つのクラスは、エンコードされています：初期、中間、および遅い。すべての3つのクラスがウイルスによりコードされたRNAポリメラーゼによって転写されていますが、各クラスには、ウイルスのライフサイクルの異なる機能を果たします。ポックスウイルスは感染時に宿主細胞環境の変調のための複数の戦略を利用する。両方のホストとウイルスの遺伝子発現の調節を理解するために、我々は、ウイルスと宿主細胞の両方から転写産物量を分析するためにゲノムワイドなアプローチを利用してきた。ここで、我々は、いくつかの時点感染後におけるワクシニアウイルスとサンプリングのRNAとHeLa細胞の経時的感染を示す。両方のホストとウイルスの全RNAを単離し、遺伝子発現の解析用マイクロアレイへのハイブリダイゼーションのために増幅されます。
Protocol
パート1：感染症のセットアップフラスコにHeLa細胞を成長し、細胞が約80％コンフルエントになるまで待ちます。 2％FBSとの定期的なDMEMと添加しない抗生物質：実験のために十分なウイルスの増殖培地を準備します。 感染症は、どちら原油既知の力価を持つワクシニアウイルスの株式、またはあなたがホストの遺伝子の発現が心配な場合は、既知の力価でウイルスを精製…
Discussion
重要なステップ
パート1＆2
ウイルス粒子を分解するために、同期ワクシニア感染症、ウイルスの最初のもの慎重に超音波処理を（またはtrypzinizing）、セットアップするには、いくつかの重要なステップがあります。ワクシニアウイルスは、集約の影響を受けやすい国である、とウイルス粒子の破壊は細胞のさらに感染を確保するために重要です。同期感?…
Acknowledgements
ホワイトヘッド研究所フェローファンド
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| TRIzol Reagent | Reagent | Invitrogen | 15596-026 | Similar reagents, such as TriPure from Roche, will also work. |
| BCP Phase Separation Reagent | Reagent | Molecular Research Center | BP151 | |
| RNase-Free DNase Set | Reagent | Qiagen | 79254 | DNase treatment is an optional step. |
References
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Vaccinia Virus InfectionTemporal AnalysisVirus Gene ExpressionPoxviridaeOrthopox GenusVariolaSmall PoxMonkeypoxVaccinia (VAC)Virus FamilyVaccinia GenomeEarly GenesIntermediate GenesLate GenesVirally-encoded RNA PolymerasesHost Cellular Environment ModulationTranscript Abundance AnalysisTime Course InfectionsHeLa CellsRNA Isolation And AmplificationMicroarray AnalysisGene Expression Analysis
Cite This Article
Yen, J., Golan, R., Rubins, K. Vaccinia Virus Infection & Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 1. J. Vis. Exp. (26), e1168, doi:10.3791/1168 (2009).