Protein Ubikitinasyon Tespiti
Summary
Ubikitinasyon üç enzimlerin kümesi tarafından yürütülen bir anahtar posttranslasyonel modifikasyonu. Bu değişiklik ilgili genler Mutasyonlar birçok farklı insan hastalıkları ile ilişkilidir. Burada, kültür hücrelerinde protein ubikuitinasyon tespit protokolleri tarif<em> In vivo</em> Ve test tüpleri<em> In vitro</em>.
Abstract
Ubikitinasyon proteinleri hedef polipeptid ubikuitin, kovalent bağlanma, üç enzimlerin kümesi tarafından yürütülen bir anahtar posttranslasyonel modifikasyonu. Ubikuitin-aktive edici enzim E1, ubikuitin-conjugating enzim E2 ve ubikuitin ligaz E3 içerir. E1 ve E2, E3 ubikuitin ligaz ekran substrat özgüllüğü aksine. Öte yandan, çok sayıda deubiquitylating enzimler polyubiquitinated proteinler işleme rolleri vardır. Ubikitinasyon protein istikrar, hücresel yerleşimi ve biyolojik aktivite değişikliği neden olabilir. Ubikuitinasyon / deubiquitination yolu veya değişmiş ubikuitin sistem işlev alan genlerin mutasyonlar, kanser, nörodejenerasyon ve metabolik bozukluklar gibi çeşitli türleri olarak çok farklı insan hastalıkları ile ilişkilidir. Hedef proteinlerin değişmiş veya normal ubikuitinasyon tespiti, bu hastalıkların patogenezi daha iyi anlaşılmasını sağlamak. Burada, kültür hücrelerinde protein ubikuitinasyon tespit protokolleri tarif<em> In vivo</em> Ve test tüpleri<em> In vitro</em>. Bu protokoller sumolyation ve neddylation gibi diğer ubikuitin gibi küçük molekül değişikliği algılamak için de yararlıdır.
Protocol
Discussion
Bu sunumda, öncelikle, kültürlü memeli hücrelerinde ilgi bir protein ubikuitin bir değişiklik olup olmadığını saptamak izin adımları nitelendirdi. Non-kovalent etkileşen proteinler üzerinde ilgi protein, özellikle ubikuitinasyon tespit etmek için, hücre parçalama, immunoprecipitation ve 1,3 yıkama için sıkı bir durum kullanılır. Bu nedenle, anti-ubikuitin immün böyle sert bir durumda hedef protein immunoprecipitation tarafından tespit Ubikitinasyon, hedef proteine özgü olma…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Rejeneratif Tıp hibe RS1-00331-1 için California Institute ve RL1-00.682-1 (Z Zhang); Amerikan Parkinson Bu çalışma NIH hibe RO1 DC006497, RO1 NS057289 ve PO1 ES016738 (Z. Zhang) tarafından desteklenmiştir. Hastalığı Derneği (Z. Zhang ve YS Choo) ve Michael J. Fox Parkinson Araştırma Vakfı (Z. Zhang).
References
- Xiong, H. PINK1, and DJ-1 form a ubiquitin E3 ligase complex promoting unfolded protein degradation. J Clin Invest. 119, 650-660 (2009).
- Xirodimas, D. P., Saville, M. K., Bourdon, J. C., Hay, R. T., Lane, D. P. Mdm2-mediated NEDD8 conjugation of p53 inhibits its transcriptional activity. Cell. 118, 83-97 (2004).
- Didier, C. RNF5, a RING finger protein that regulates cell motility by targeting paxillin ubiquitination and altered localization. Mol Cell Biol. 23, 5331-5345 (2003).
- Laney, J. D., Hochsetrasser, M. Unit 14.5 Analysis of Protein Ubiquitination. Current Protocols in Protein Science. , 14.5.1-14.5.11 (2002).
