전기 분무 이온화 질량 분광법을 사용하여 효모 Lipidome의 양적 평가
Summary
우리는 조사 스캔 전기 분무 이온화 질량 분광법 (ESI / MS)를 사용하여 효모의 수많은 지질 수종을 식별하기위한 새로운 양적 lipidomics 방법을 설명합니다. 이 방법은 현재 lipids, 감도 및 속도의 다양한 분자 형태를 해결하는 능력 지질 식별 및 부량 사용할 방법을 초과했습니다.
Abstract
Lipids은 biomolecules의 주요 클래스 중 하나이며 중요한 역할 막 역학, 에너지 저장을 재생하고, 신호<sup> 1-4</sup>. 신진 효모<em> Saccharomyces cerevisiae</em> 주석 게놈 매우 간단한 lipidome있는 유전자와 화학적으로 manipulable 단세포 진핵세포 생물은 다세포 eukaryotes 다양한 지질 종류의 생물 학적 기능을 연구를위한 귀중한 모델입니다<sup> 2,3,5</sup>.<em> S. cerevisiae</em> 체인 주로 16 또는 18 탄소 원자와 하나 영 길이 또는 unsaturation 중 하나 학위 lipids 10 주요 클래스를 가지고<sup> 6,7</sup>. 지질 식별 및 부량에 대한 기존 방법 – 같은 고성능 액체 크로마 토그래피, 박막 크로마 토그래피, 형광 현미경, 그리고 MS의 다음 기체 크로마 토그래피로이 – 잘 설립하지만, 낮은 감성, lipids의 충분 별도의 다양한 분자 형태가 이전의 지질 derivitization를 필요로 가지고 있습니다 분석하거나, 꽤 시간이 소요될 수 있습니다. 여기 우리는 효모 세포에서 lipids의 전체 보완의 식별 및 부량에 대한 조사 스캔 ESI / MS를 사용하여 이러한 고유의 한계를 해결하기 위해 실험적인 접근 방법에 대한 자세한 설명을 제시한다. 설명한 방법은 크게함으로써 데이터 수집 과정을 가속, 효모 세포에서 발견한 복잡한 지질 혼합물의 분리 색층을 필요로하지 않습니다. 이 방법은 G / ML로 낮은 농도에서 지질 식별 및 부량을 활성화하고 성공적으로 전체 효모 세포 및 정화 organelles의 lipidomes를 평가에 적용되었습니다. 지질 분석이 방법을 사용하기위한 전체 효모 세포에서 Lipids 추출 두세 시간 정도 소요됩니다. 이것은 나노 전기 분무 소스 갖춘 Q – TOF 질량 분석기를 추출하여 건조 lipids 각각의 예제를 실행하기 위해 다섯 10 분 걸립니다.
Protocol
Discussion
이 방법은 쉽게 사용할 수, 저렴한 재료를 사용하여 효모 lipidome의 급속한 양적 평가를 수 있습니다. 이러한 lipids가 수산화 리튬과 수산화 암모늄을 대체하여 확인할 수 있지만이 방법은, diacylglycerols, ergosterols 및 ergosteryl 에스테르를 제외한 효모 세포에있는 지질의 종류 대부분의 신분증을 수 있습니다. 설명한 방법은 농도 선형성은 진도 2 ~ 3 주문 (지질 종류에 따라 다름) 이상의 확산과 함?…
Acknowledgements
우리는 귀중한 조언, 토론 및 기술 지원 알랭 테시어에 감사하고 있습니다. 우리는 뛰어난 서비스 콩코디아 대학에서 질량 분석법의 생물 학적 응용 프로그램을위한 센터를 인정합니다. 이 작품은 CIHR과 캐나다의 NSERC에서 보조금에 의해 지원되었다. VIT는 CIHR 새로운 인베스티게이터와 게놈의 콩코디아 대학 연구 위원장, 세포 생물학 및 노화입니다.
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