人类DNA修复蛋白的遗传研究利用酵母作为模型系统
Summary
可在酵母的遗传研究调查的人类基因在细胞DNA的代谢的分子和细胞的功能。方法描述为人类的遗传特征<em> WRN</em>早衰障碍沃纳综合征在使用酵母作为一个听话的模型系统的功能保守的途径有缺陷的基因产物。
Abstract
了解人类DNA修复蛋白的遗传途径的角色，是一个严峻的挑战，许多研究者。在哺乳动物系统中的遗传研究已经有限的，由于缺乏现成的工具，包括定义的突变基因的细胞株，表达系统的监管，并适当的可选标记。为了规避这些困难，在低等真核生物的遗传模型系统功能保守的DNA修复蛋白和途径的研究已成为有吸引力的选择。我们已经开发了一个模型酵母系统来研究，沃纳综合征的解旋酶，核酸定义不清的基因功能（<em> WRN</em>）在核酸代谢。与定义的遗传突变背景相关的细胞表型，可以进行调查，以澄清的细胞和分子功能<em> WRN</em通过其催化活性和蛋白质的相互作用。人类<em> WRN</em>基因和相关的变体，克隆DNA质粒在酵母中的表达，可以放在监管质粒元素的控制下。表达式构造，然后可以转换成相应的酵母突变体的背景下，通过多种方法检测的遗传功能。使用这种方法，我们确定<em> WRN</em>，其相关的RecQ家庭成员BLM和Sgs1一样，工作在TOP3依赖途径可能为基因组稳定性的重要。这是在最近出版的[1]在描述的<a href="http://www.impactaging.com"> www.impactaging.com</a>。本文提供详细的方法，具体分析在酵母遗传互补研究。
Protocol
Discussion
利用酵母作为模型系统的优势之一是在定义的DNA复制和修复的途径，酵母和人类之间的保守突变体的可用性。进一步选择窝藏的特定基因的转化是很容易的和可靠的实验室菌株营养缺陷型突变体，并与营养缺陷型标记载体，都是现成的。使用这些载体的基因产物的表达可诱导启动子的控制（例如，半乳糖苷酶诱导启动子，等）置于受。考虑到这些优势，我们开发的酵母为基础的模型系统研究沃纳?…
Acknowledgements
完全支持这项工作是由美国国立卫生研究院，国家老龄问题研究所的院内研究计划。我们感谢SGS1表达质粒的酵母菌株和布拉德约翰逊博士（美国宾夕法尼亚大学医学院，费城，宾夕法尼亚）的博士罗德尼罗斯坦（哥伦比亚大学）。
References
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