Medaka e zebrafish sono complementari per la dissezione genetica delle funzioni del genoma dei vertebrati. Questo protocollo mette in evidenza i punti chiave per il successo microiniezione in embrioni Medaka, una tecnica importante per l'analisi embriologiche e genetiche utilizzando Medaka zebrafish e in un laboratorio.
In questo video, dimostriamo la tecnica della microiniezione in una cella di embrioni fase Medaka. Medaka è un piccolo deposizione delle uova di pesce d'acqua dolce che permette le analisi genetiche ed embriologica ed è uno degli organismi modello vertebrato, in cui sono state effettuate genome-wide schermi mutante fenotipo-scacciati 1, come nel pesce zebra e il mouse. Divergenza di sovrapposizione funzionale di geni correlati tra Medaka zebrafish e consente l'identificazione di fenotipi romanzo che sono identificabili in una singola specie 2, così Medaka e zebrafish sono complementari per la dissezione genetica delle funzioni del genoma dei vertebrati.
Per usufruire di pesce Medaka cui gli embrioni sono trasparenti e sviluppano esternamente, microiniezione è una tecnica essenziale per iniettare cellule traccianti per le cellule etichettatura, mRNA o anti-senso oligonucleotidi per eccesso di esprimere e bussare a tendina geni di interesse, e di DNA per fare linee transgeniche.
In questo video, si dimostra un metodo per tracciante cellulare, mRNA, DNA o anti-senso iniezione oligonucleotide in una cella di embrioni fase Medaka. Questa tecnica ci ha permesso di studiare vari processi di sviluppo in-vivo in tempo reale. Questo processo e la successiva analisi dettagliata che offre ha il potenziale per migliorare significativamente la nostra comprensione della organogenesi vertebrati e la biologia delle cellule sottostanti. Tale conoscenza può essere importante per, e la resa applicazioni terapeutiche nel campo della medicina rigenerativa.
Questo lavoro è stato sostenuto da un finanziamento della MRC.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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4″ fine net | Tools | J & K Aquatics Ltd. | MD001 | Used to capture fish during egg harvesting. |
Embryo medium | Reagent | Made in-house | 200ml 50X stock solution, 1ml 1%methyleneblue in H2O/10 liter RO water (50X stock solution: NaCl 14.7g, KCl 0.6g, CaCl2 2H2O 2.4g, MgSO4 7H2O 4.0g/1 litre RO water. | |
Fine waterproof sandpaper – p2000 grit size | Tools | Hermes Abrasives Ltd. | Very fine grit size for rolling/cleaning embryos with chorions. | |
Borosilicate glass capillaries | Tool | Harvard Apparatus | GC100-10F | For making microinjection needles. |
Micropipette puller | Equipment | Narishige scientific instrument lab | Model PP-830 | For making microinjection needles. |
Eppendorf microloader | Tool | Eppendorf | 5242956.003 | For loading microinjection needles. |
Microinjector apparatus | Equipment | Eppendorf | Model 5242. | |
Micromanipulator | Equipment | Narishige | Model MN151. | |
Agarose injection plate | Tools | Made in-house | For holding embryos during injection. |