Medaka en zebravissen zijn complementair voor genetische dissectie van gewervelde genoom functies. Dit protocol worden de belangrijkste punten voor een succesvolle micro-injectie in medaka embryo's, een belangrijke techniek voor de embryologische en genetische analyse met behulp van medaka en zebravis in een laboratorium.
In deze video, tonen we de techniek van micro-injectie in een-cellig stadium medaka embryo's. Medaka is een klein ei-leggen zoetwatervis dat zowel genetische en embryologische analyses maakt en is een van de gewervelde model organismen waarvan het genoom-brede fenotype aangedreven mutant schermen werden uitgevoerd 1, net als in zebravis en de muis. Divergentie van de functionele overlap van gerelateerde genen tussen medaka en zebravis maakt identificatie van nieuwe fenotypen die niet identificeerbaar zijn in een enkele soort twee, dus medaka en zebravissen zijn complementair voor genetische dissectie van gewervelde genoom functies.
Om te profiteren van medaka vis die als embryo doorzichtig en ontwikkelen extern, micro-injectie is een essentiële techniek om cel-tracers injecteren voor het labelen van cellen, mRNA's of anti-sense oligonucleotiden voor de over-expressie en kloppen-down genen van belang, en de DNA's voor het maken van transgene lijnen.
In deze video tonen we een methode voor cel tracer, mRNA, DNA of anti-sense oligonucleotide injectie in een-cellig stadium medaka embryo's. Deze techniek heeft ons in staat gesteld de verschillende ontwikkelings-processen te bestuderen in-vivo in real-time. Dit proces en de daaropvolgende gedetailleerde analyse biedt de potentie heeft om aanzienlijk te verbeteren ons begrip van gewervelde organogenese en de onderliggende celbiologie. Deze kennis kan van belang zijn voor, en de opbrengst therapeutische toepassingen in de regeneratieve geneeskunde.
Dit werk werd ondersteund door een subsidie van de MRC.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
4″ fine net | Tools | J & K Aquatics Ltd. | MD001 | Used to capture fish during egg harvesting. |
Embryo medium | Reagent | Made in-house | 200ml 50X stock solution, 1ml 1%methyleneblue in H2O/10 liter RO water (50X stock solution: NaCl 14.7g, KCl 0.6g, CaCl2 2H2O 2.4g, MgSO4 7H2O 4.0g/1 litre RO water. | |
Fine waterproof sandpaper – p2000 grit size | Tools | Hermes Abrasives Ltd. | Very fine grit size for rolling/cleaning embryos with chorions. | |
Borosilicate glass capillaries | Tool | Harvard Apparatus | GC100-10F | For making microinjection needles. |
Micropipette puller | Equipment | Narishige scientific instrument lab | Model PP-830 | For making microinjection needles. |
Eppendorf microloader | Tool | Eppendorf | 5242956.003 | For loading microinjection needles. |
Microinjector apparatus | Equipment | Eppendorf | Model 5242. | |
Micromanipulator | Equipment | Narishige | Model MN151. | |
Agarose injection plate | Tools | Made in-house | For holding embryos during injection. |