الميداكا الزرد ومكملة للتشريح وظائف الجينوم الوراثي للالفقاريات. هذا البروتوكول يسلط الضوء على النقاط الرئيسية للنجاح في microinjection الميداكا الأجنة ، وهي تقنية هامة لتحليل الجنينية والجينية باستخدام الميداكا والزرد في المختبر.
في هذا الفيديو ، ونحن لشرح أسلوب واحد في microinjection الخلية مرحلة الأجنة الميداكا. الميداكا صغيرة أسماك المياه العذبة وضع البيض على حد سواء التي تتيح التحليلات الجينية والجنينية ، وهي واحدة من الكائنات الفقارية في نموذج التي أجريت على مستوى الجينوم النمط الظاهري يحركها شاشات متحولة إلى 1 ، كما هو الحال في الزرد والفأر. اختلاف في تداخل الجينات الوظيفية ذات الصلة بين الميداكا الزرد ويسمح تحديد الظواهر الجديدة التي يتم التحقق من هويته في نوع واحد 2 ، وبالتالي الميداكا الزرد ومكملة للتشريح وظائف الجينوم الوراثي للالفقاريات.
للاستفادة من الأسماك التي الميداكا الأجنة تتسم بالشفافية وتطوير خارجيا ، microinjection هو تقنية ضرورية لحقن الخلايا استشفاف لخلايا وضع العلامات ، أو [أليغنوكليوتيد] mRNAs المضادة للشعور الإفراط في التعبير عن وهدمت – الجينات في المصالح ، والسلطات الوطنية المعينة لصنع خطوط المعدلة وراثيا.
في هذا الفيديو ، ونحن يبرهن على وجود طريقة لتتبع الخلايا ، مرنا ، الحمض النووي أو المضادة الحس قليل النوكليوتيد حقن الخلايا في واحدة مرحلة الأجنة الميداكا. وقد سمحت لنا هذه التقنية لدراسة العمليات التنموية المختلفة في الجسم الحي ، في الوقت الحقيقي. هذه العملية وتحليل مفصل لاحقا أنه يتيح لديه القدرة على تعزيز كثيرا من فهمنا للorganogenesis الفقاريات وبيولوجيا الخلايا الكامنة. هذه المعرفة قد تكون مهمة ل، ويسفر عن تطبيقات علاجية في الطب التجديدي.
وأيد هذا العمل من خلال منحة مقدمة من لجنة نهر الميكونج.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
4″ fine net | Tools | J & K Aquatics Ltd. | MD001 | Used to capture fish during egg harvesting. |
Embryo medium | Reagent | Made in-house | 200ml 50X stock solution, 1ml 1%methyleneblue in H2O/10 liter RO water (50X stock solution: NaCl 14.7g, KCl 0.6g, CaCl2 2H2O 2.4g, MgSO4 7H2O 4.0g/1 litre RO water. | |
Fine waterproof sandpaper – p2000 grit size | Tools | Hermes Abrasives Ltd. | Very fine grit size for rolling/cleaning embryos with chorions. | |
Borosilicate glass capillaries | Tool | Harvard Apparatus | GC100-10F | For making microinjection needles. |
Micropipette puller | Equipment | Narishige scientific instrument lab | Model PP-830 | For making microinjection needles. |
Eppendorf microloader | Tool | Eppendorf | 5242956.003 | For loading microinjection needles. |
Microinjector apparatus | Equipment | Eppendorf | Model 5242. | |
Micromanipulator | Equipment | Narishige | Model MN151. | |
Agarose injection plate | Tools | Made in-house | For holding embryos during injection. |