Medaka ve zebrafish omurgalı genomu fonksiyonları genetik diseksiyon için tamamlayıcı niteliktedir. Bu protokol, Medaka embriyolara başarılı mikroenjeksiyon, bir laboratuvarda Medaka ve zebrafish kullanarak embriyolojik ve genetik analiz için önemli bir tekniktir için kilit noktaları vurgulamaktadır.
Bu video, tek hücreli aşamada Medaka embriyolar içine mikroenjeksiyon tekniği göstermektedir. Medaka, hem de genetik ve embriyolojik analizler sağlar ve omurgalı model organizmaların genom fenotip odaklı mutant ekranları Zebra balığı ve fare gibi, 1 gerçekleştirilmiştir hangi bir yumurta küçük bir tatlı su balığı . Medaka ve zebrafish arasında ilgili genlerin fonksiyonel örtüşme Farklılıklar, böylece tek bir türün 2, Medaka ve zebrafish omurgalı genomu fonksiyonları genetik diseksiyon için tamamlayıcı tanımlanamayan roman fenotiplerinin kimlik sağlar .
Embriyolar, şeffaf ve dışarıdan geliştirmek Medaka balık yararlanmak için, mikroenjeksiyon yapmak için aşırı ifade ve vurma aşağı ilgi genler ve DNA'lar etiketleme hücreleri, ya da anti-sense mRNA'ların oligonükleotidler için tracerlerin hücre enjekte etmek için önemli bir tekniktir transgenik hatları.
Bu video, biz, tek hücre sahne Medaka embriyolar içine hücre tracer, mRNA, DNA veya anti-sense oligonükleotid enjeksiyon için bir yöntem ortaya koymaktadır. Bu teknik bize gerçek zamanlı in-vivo çeşitli gelişim süreçlerini incelemek için izin verdi. Bu süreç ve daha sonraki detaylı analiz onu tanıyor, önemli omurgalı organogenez ve temel hücre biyolojisi anlayışımızı geliştirmek için bir potansiyele sahiptir. Bu tür bilgi ve rejeneratif tıp terapötik uygulamalar verim olabilir.
Bu çalışma, MRC bir hibe ile desteklenmiştir.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
4″ fine net | Tools | J & K Aquatics Ltd. | MD001 | Used to capture fish during egg harvesting. |
Embryo medium | Reagent | Made in-house | 200ml 50X stock solution, 1ml 1%methyleneblue in H2O/10 liter RO water (50X stock solution: NaCl 14.7g, KCl 0.6g, CaCl2 2H2O 2.4g, MgSO4 7H2O 4.0g/1 litre RO water. | |
Fine waterproof sandpaper – p2000 grit size | Tools | Hermes Abrasives Ltd. | Very fine grit size for rolling/cleaning embryos with chorions. | |
Borosilicate glass capillaries | Tool | Harvard Apparatus | GC100-10F | For making microinjection needles. |
Micropipette puller | Equipment | Narishige scientific instrument lab | Model PP-830 | For making microinjection needles. |
Eppendorf microloader | Tool | Eppendorf | 5242956.003 | For loading microinjection needles. |
Microinjector apparatus | Equipment | Eppendorf | Model 5242. | |
Micromanipulator | Equipment | Narishige | Model MN151. | |
Agarose injection plate | Tools | Made in-house | For holding embryos during injection. |