Medaka और zebrafish हड्डीवाला जीनोम कार्यों की आनुवंशिक विच्छेदन के लिए पूरक हैं. इस प्रोटोकॉल medaka भ्रूण में सफल microinjection, embryological और आनुवांशिक विश्लेषण के लिए एक महत्वपूर्ण तकनीक है एक प्रयोगशाला में medaka और zebrafish का उपयोग कर के लिए महत्वपूर्ण बिंदुओं पर प्रकाश डाला गया.
इस वीडियो में, हम एक सेल चरण medaka भ्रूण में microinjection की तकनीक को प्रदर्शित करता है. Medaka एक छोटे से अंडे बिछाने मीठे पानी मछली है कि दोनों आनुवंशिक और embryological विश्लेषण की अनुमति देता है और एक हड्डीवाला मॉडल जीवों में जो जीनोम चौड़ा phenotype संचालित उत्परिवर्ती स्क्रीन 1 बाहर किए गए zebrafish और माउस के रूप में , है है. Medaka और zebrafish के बीच संबंधित जीन की कार्यात्मक ओवरलैप के विचलन उपन्यास phenotypes कि एक एकल 2 प्रजातियों, इस प्रकार medaka और zebrafish हड्डीवाला जीनोम कार्यों की आनुवंशिक विच्छेदन के लिए पूरक हैं में unidentifiable रहे हैं की पहचान की अनुमति देता है.
Medaka मछली भ्रूण जिसका पारदर्शी होते हैं और बाह्य विकास का लाभ ले करने के लिए, microinjection एक आवश्यक तकनीक बनाने के लिए कोशिकाओं, mRNAs या विरोधी भावना oligonucleotides लेबलिंग के लिए सेल tracers ब्याज की अधिक व्यक्त और दस्तक नीचे जीन, और DNAs के लिए इंजेक्षन ट्रांसजेनिक लाइनों.
इस वीडियो में, हम एक सेल चरण medaka भ्रूण में सेल अनुरेखक, mRNA, डीएनए या विरोधी भावना oligonucleotide इंजेक्शन के लिए एक विधि का प्रदर्शन. इस तकनीक हमें विभिन्न विकासात्मक प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए वास्तविक समय में में vivo के लिए अनुमति दी गई है. इस प्रक्रिया को और बाद में विस्तृत विश्लेषण यह परमिट के लिए काफी हड्डीवाला organogenesis और अंतर्निहित कोशिका जीव विज्ञान के बारे में हमारी समझ को बढ़ाने की क्षमता है. ऐसे ज्ञान के लिए महत्वपूर्ण हो सकता है, और पुनर्योजी चिकित्सा में चिकित्सीय अनुप्रयोगों उपज सकता है.
इस काम MRC से एक अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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4″ fine net | Tools | J & K Aquatics Ltd. | MD001 | Used to capture fish during egg harvesting. |
Embryo medium | Reagent | Made in-house | 200ml 50X stock solution, 1ml 1%methyleneblue in H2O/10 liter RO water (50X stock solution: NaCl 14.7g, KCl 0.6g, CaCl2 2H2O 2.4g, MgSO4 7H2O 4.0g/1 litre RO water. | |
Fine waterproof sandpaper – p2000 grit size | Tools | Hermes Abrasives Ltd. | Very fine grit size for rolling/cleaning embryos with chorions. | |
Borosilicate glass capillaries | Tool | Harvard Apparatus | GC100-10F | For making microinjection needles. |
Micropipette puller | Equipment | Narishige scientific instrument lab | Model PP-830 | For making microinjection needles. |
Eppendorf microloader | Tool | Eppendorf | 5242956.003 | For loading microinjection needles. |
Microinjector apparatus | Equipment | Eppendorf | Model 5242. | |
Micromanipulator | Equipment | Narishige | Model MN151. | |
Agarose injection plate | Tools | Made in-house | For holding embryos during injection. |