L'isolement de l'homme de l'artère ombilicale cellules musculaires lisses (HUASMC)
Summary
Le cordon ombilical sont utilisées pour isoler des cellules musculaires lisses de différentes façons. Dans ce travail nous avons utilisé le traitement enzymatique de cellules musculaires lisses isolées.
Abstract
Le cordon ombilical humain (UC) est un échantillon biologique qui peut être facilement obtenue juste après la naissance. Cet échantillon biologique est, la plupart du temps, mis au rebut et leur collection ne signifie pas que tout risque ajoutée à la santé maternelle et néonatale ou la mère s. En outre, aucune des préoccupations éthiques sont soulevées. L'UC est composé d'une veine et deux artères à partir de laquelle les deux cellules endothéliales (CE)<sup> 1</supCellules musculaires> et lisse (SMC)<sup> 2</sup>, Deux des principaux composants cellulaires des vaisseaux sanguins, peut être isolé. Dans ce projet, le SMC ont été obtenues après traitement enzymatique des artères UC conséquence la procédure expérimentale décrite précédemment par Jaffe<em> Et al</em<sup> 3</sup>. Après isolement des cellules qu'ils ont été conservés dans le T-Flash avec du DMEM-F12 supplémenté avec 5% de sérum de veau fœtal et ont été cultivées pendant plusieurs passages. Les cellules ont conservé leur morphologie et d'autres caractéristiques phénotypiques dans les différentes générations. Le but de cette étude était d'isoler les cellules musculaires lisses afin de les utiliser comme modèles pour les essais futurs avec des médicaments constrictor, d'isoler et de caractériser structurellement canaux calciques de type L, d'étudier les aspects cellulaires et moléculaires de la fonction vasculaire<sup> 4</sup> Et de les utiliser dans l'ingénierie tissulaire.
Protocol
Discussion
Le SMC peut être utilisé en tant que modèles pour les essais futurs avec des médicaments constrictor, d'isoler et de caractériser les canaux calciques structurellement de type L, d'étudier les aspects cellulaires et moléculaires de la fonction vasculaire et de les utiliser dans l'ingénierie tissulaire. SMC et ECS sont fondamentales pour le développement de nouveaux biomatériaux qui peuvent être utilisés dans la production de semi-synthèse des vaisseaux sanguins pour être utilisé chez l'hom…
Acknowledgements
Hôpital Amato Lusitano, Castelo Branco au Portugal.
Hôpital Sousa Martins, Guarda au Portugal.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-F12 | Sigma-Aldrich | 095K8311 | ||
| Fetal bovine serum (FBS) | Biochrom-AG | 0117T | ||
| RPMI 1640 | Gibco | 3103806 | ||
| Collagen | Sigma-Aldrich | 067K2302 | ||
| Antibiotic | 10 μL/ 1 mL of medium | |||
| Scissors | Sterilized | |||
| Needle | Diameter of 0.6-1mm | |||
| Syringe | 10 – 20 mL | |||
| Physiological Saline Solution (PSS) | 20-40 mL per artery | |||
| Collagenase type I | Sigma-Aldrich | 047K1052 | 3 mL per artery | |
| Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS) | Diluted collagenase | |||
| Phosphate buffered saline solution (PBS) | Warmed to 37°C |
References
- Van Rijen, H. Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).
- Martín de Llano, J. Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels. Translational Research. 149 (1), 1-9 (2007).
- Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).
- Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 45 (3), 175-184 (2009).
