Isolamento di cellule umane ombelicale muscolatura liscia arteriosa (HUASMC)
Summary
Il cordone ombelicale sono utilizzate per isolare le cellule muscolari lisce per vie diverse. In questo lavoro abbiamo usato il trattamento enzimatico per isolato cellule muscolari lisce.
Abstract
Il cordone ombelicale umano (UC) è un campione biologico che può essere facilmente ottenuto solo dopo la nascita. Questo campione biologico è, il più delle volte, scartati e la loro raccolta non comporta alcun rischio aggiuntivo per la salute neonato o la madre s. Inoltre non sono preoccupazioni etiche sollevate. L'UC è composto da una vena e due arterie da cui entrambe le cellule endoteliali (EC)<sup> 1</supCellule muscolari> e liscia (SMC)<sup> 2</sup>, Due dei principali componenti cellulari dei vasi sanguigni, può essere isolato. In questo progetto la SMC sono stati ottenuti dopo il trattamento enzimatico delle arterie UC di conseguenza la procedura sperimentale descritta da Jaffe<em> Et al</em<sup> 3</sup>. Dopo l'isolamento delle cellule sono stati tenuti in t-flash con DMEM-F12 integrato con il 5% di siero fetale bovino e sono state coltivate per diversi passaggi. Cellule mantenuto le loro caratteristiche morfologiche e fenotipiche altri nelle generazioni diverse. Lo scopo di questo studio è stato quello di isolare le cellule muscolari lisce al fine di utilizzarli come modelli per le analisi future con farmaci constrictor, isolare e caratterizzare strutturalmente di tipo L canali del calcio, per studiare gli aspetti cellulari e molecolari della funzione vascolare<sup> 4</sup> E di utilizzarli in ingegneria dei tessuti.
Protocol
Discussion
Le SMC possono essere utilizzati come modelli per i test futuri con farmaci constrictor, di isolare e caratterizzare strutturalmente di tipo L canali del calcio, per studiare gli aspetti cellulari e molecolari della funzione vascolare e di utilizzarli in ingegneria dei tessuti. SMC e EC sono fondamentali per lo sviluppo di nuovi biomateriali che possono essere utilizzati per la produzione di semi vasi sanguigni sintetici da utilizzare negli esseri umani.
Acknowledgements
Ospedale Amato Lusitano, Castelo Branco in Portogallo.
Ospedale Sousa Martins, Guarda il Portogallo.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-F12 | Sigma-Aldrich | 095K8311 | ||
| Fetal bovine serum (FBS) | Biochrom-AG | 0117T | ||
| RPMI 1640 | Gibco | 3103806 | ||
| Collagen | Sigma-Aldrich | 067K2302 | ||
| Antibiotic | 10 μL/ 1 mL of medium | |||
| Scissors | Sterilized | |||
| Needle | Diameter of 0.6-1mm | |||
| Syringe | 10 – 20 mL | |||
| Physiological Saline Solution (PSS) | 20-40 mL per artery | |||
| Collagenase type I | Sigma-Aldrich | 047K1052 | 3 mL per artery | |
| Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS) | Diluted collagenase | |||
| Phosphate buffered saline solution (PBS) | Warmed to 37°C |
References
- Van Rijen, H. Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).
- Martín de Llano, J. Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels. Translational Research. 149 (1), 1-9 (2007).
- Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).
- Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 45 (3), 175-184 (2009).
