ヒト臍帯動脈平滑筋細胞の単離（HUASMC）
Summary
臍帯は、異なる方法で平滑筋細胞を単離するために使用されています。本研究では孤立した平滑筋細胞への酵素処理を使用していました。
Abstract
ヒト臍帯（UC）は容易にちょうど出産後に得られる生物学的サンプルです。この生物学的サンプルは、、ほとんどの時間です。破棄され、彼らのコレクションは、新生児や母親の健康への追加リスクを意味するものではありません。さらには倫理的な問題は発生しません。 UCは、1つの静脈との両方から内皮細胞（ECS）は、2つの動脈によって構成されています<sup> 1</sup>と平滑筋細胞（平滑筋細胞）<sup> 2</sup>、血管の主な細胞成分の二つは、単離することができる。このプロジェクトでは平滑筋細胞は、それに応じてUCの動脈の酵素処理前にジャッフェによって記述された実験手順後に得られた<em>ら</em<sup> 3</sup>。細胞単離後、彼らは、ウシ胎児血清5％を補充し、いくつかの継代培養したDMEM – F12とのT -フラッシュに格納されていました。細胞は様々な世代で、その形態学的及び他の表現型の特性を維持した。本研究の目的は、収縮薬との将来のアッセイのためのモデルとしてそれらを使用する分離し、構造的にL型カルシウムチャネルを特徴づける、血管機能の細胞および分子的側面を研究するために、平滑筋細胞を分離することでした<sup> 4</sup>と組織工学でそれらを使用する。
Protocol
Discussion
SMCは、血管機能の細胞および分子的側面を研究し、組織工学でそれらを使用するために、分離と構造的にL型カルシウムチャネルを特徴づけるために、収縮薬との将来のアッセイのためのモデルとして使用することができます。平滑筋細胞と内皮はヒトで使用される半合成血管の生産に使用できる新しいバイオマテリアルの開発のための基本です。
Acknowledgements
病院アマートルージターノ、カステロブランコポルトガル。
病院スーザマルティンス、グアルダポルトガル。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-F12 | Sigma-Aldrich | 095K8311 | ||
| Fetal bovine serum (FBS) | Biochrom-AG | 0117T | ||
| RPMI 1640 | Gibco | 3103806 | ||
| Collagen | Sigma-Aldrich | 067K2302 | ||
| Antibiotic | 10 μL/ 1 mL of medium | |||
| Scissors | Sterilized | |||
| Needle | Diameter of 0.6-1mm | |||
| Syringe | 10 – 20 mL | |||
| Physiological Saline Solution (PSS) | 20-40 mL per artery | |||
| Collagenase type I | Sigma-Aldrich | 047K1052 | 3 mL per artery | |
| Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS) | Diluted collagenase | |||
| Phosphate buffered saline solution (PBS) | Warmed to 37°C |
References
- Van Rijen, H. Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).
- Martín de Llano, J. Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels. Translational Research. 149 (1), 1-9 (2007).
- Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).
- Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 45 (3), 175-184 (2009).
