मानव नाल धमनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं के अलगाव (HUASMC)
Summary
गर्भनाल के लिए अलग अलग तरीकों से चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं को अलग किया जाता है. इस काम में हम पृथक चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं enzymatic उपचार का इस्तेमाल किया.
Abstract
मानव गर्भनाल (यूसी) के एक नमूना जैविक है कि आसानी से जन्म के बाद ही प्राप्त किया जा सकता है. यह नमूना जैविक है, ज्यादातर समय, त्याग और उनके संग्रह के किसी भी जोड़ा नवजात शिशु या माँ के स्वास्थ्य के लिए जोखिम संकेत नहीं करता है. इसके अलावा कोई नैतिक चिंताओं को उठाया जाता है. UC एक नस और दो धमनियों जिसमें से दोनों endothelial कोशिकाओं (ईसीएस) से बना है<sup> 1</sup> और चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं (SMCs)<sup2></sup> रक्त वाहिकाओं के मुख्य सेलुलर घटकों के, दो अलग किया जा सकता है. इस परियोजना में SMCs यूसी धमनियों के enzymatic तदनुसार प्रयोगात्मक पहले Jaffe द्वारा वर्णित प्रक्रिया उपचार के बाद प्राप्त किया गया<em> एट अल</em<sup> 3</sup>. सेल अलगाव के बाद वे टी – फ्लैश में DMEM-F12 भ्रूण गोजातीय सीरम के 5% के साथ पूरक थे और कई मार्ग के लिए सुसंस्कृत के साथ रखा गया था. कक्ष उनके अलग अलग पीढ़ियों में morphological और अन्य प्ररूपी विशेषताओं को बनाए रखा. इस अध्ययन का उद्देश्य के लिए चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं को अलग क्रम में उन्हें कंस्ट्रिकटर दवाओं के साथ भविष्य assays के लिए मॉडल के रूप में में उपयोग किया गया था अलग है, और structurally एल प्रकार कैल्शियम चैनल, नाड़ी समारोह के सेलुलर और आणविक पहलुओं का अध्ययन विशेषताएँ<sup> 4</sup> और उन्हें ऊतक इंजीनियरिंग में उपयोग करने के लिए.
Protocol
Discussion
एसएमसी कंस्ट्रिकटर दवाओं के साथ भविष्य assays के लिए मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, अलग करने के लिए और structurally एल प्रकार कैल्शियम चैनल विशेषताएँ नाड़ी समारोह के सेलुलर और आणविक पहलुओं का अध्ययन करन…
Acknowledgements
अस्पताल Amato Lusitano, Castelo Branco पुर्तगाल.
अस्पताल Sousa मार्टिंस, Guarda पुर्तगाल.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-F12 | Sigma-Aldrich | 095K8311 | ||
| Fetal bovine serum (FBS) | Biochrom-AG | 0117T | ||
| RPMI 1640 | Gibco | 3103806 | ||
| Collagen | Sigma-Aldrich | 067K2302 | ||
| Antibiotic | 10 μL/ 1 mL of medium | |||
| Scissors | Sterilized | |||
| Needle | Diameter of 0.6-1mm | |||
| Syringe | 10 – 20 mL | |||
| Physiological Saline Solution (PSS) | 20-40 mL per artery | |||
| Collagenase type I | Sigma-Aldrich | 047K1052 | 3 mL per artery | |
| Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS) | Diluted collagenase | |||
| Phosphate buffered saline solution (PBS) | Warmed to 37°C |
References
- Van Rijen, H. Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).
- Martín de Llano, J. Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels. Translational Research. 149 (1), 1-9 (2007).
- Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).
- Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 45 (3), 175-184 (2009).
