Overview
C.エレガンス の産卵行動は、発達、生殖、解剖学的研究において重要な情報を提供することができる。 このビデオでは、産卵アッセイの重要なステップを紹介し、生殖毒性について薬物を試験するサンプル実験を示す。
Protocol
リーとカン、化学薬品がカエノハブディティス・エレガンスの成長と繁殖に及ぼす影響を測定する、J. Vis. Exp.(2017).
1.C.エレガンス産卵アッセイ
- 20°Cの若年成人期までDMSOまたはエトポシドを含むNGMプレート上で64時間(初産前)に年齢同期卵をインキュベートする。
注: 成長測定実験からワームを使用することは任意である。成長測定と産卵アッセイを一緒に行うと便利です。 - 5つの成虫を化学物質なしで新しいNGMプレートに移し(条件1、一定期間内の化学的処理、卵から若年期までの)、または同じ化学前処理(条件2、全体的な実験期間を通じた化学物質の継続的な暴露)を含む新しいNGMプレートを24時間インキュベートする。
注: 各処理に3-5 NGMプレートを使用して複製することをお勧めします。これらの反復は統計分析に使用できます。 - 上述の新しいNGMプレートに移し、毎日卵の数を数えます。這い落とし、死んで、内部的に孵化したワームを数えます。
- ワームが卵を産まないまで、通常5日でこれらの手順を繰り返します。
- 各プレートからワームごとに産卵する卵の数を計算し、これらの値を毎日5日間合計して、産卵の総数を決定します。
注:クロールされたワームの数を除外し、内部的にハッチングしたワームの数を計算から除外します。
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
Dimethyl sulfoxide | Sigma, USA | D2650 | |
Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
Etoposide | Sigma, USA | E1383 | |
35 × 10 mm Petri dish | SPL Life Sciences, South Korea | 10035 | |
Stereo microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |