Overview
C. elegans äggläggning beteende kan ge viktig information i utvecklings-, reproduktiva och anatomiska studier. Denna video introducerar de viktiga stegen i en äggläggningsanalys och visar ett provexperiment där ett läkemedel testas för reproduktiv toxicitet.
Protocol
Lee och Kang, Mäta effekten av kemikalier på tillväxt och reproduktion av Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).
1.C. elegans äggläggningsanalys
- Inkubera de ålderssynkronerade äggen på NGM-plattan som innehåller DMSO eller etoposide i 64 timmar (före första födseln) fram till den unga vuxna scenen vid 20 °C.
OBS: Det är valfritt att använda maskarna från tillväxtmätningsexperimenten. Det är bekvämt att göra tillväxtmätningen och äggläggningsanalysen tillsammans. - Överför 5 vuxna maskar till de nya NGM-plattorna utan kemikalier (tillstånd 1, kemisk behandling inom en viss tidsperiod, från ägg till unga vuxna) eller ny NGM-platta som innehåller samma kemiska förbehandling (tillstånd 2, kontinuerlig exponering av kemikalier under den totala experimentella perioden) och inkubera dem sedan i 24 timmar.
OBS: Det rekommenderas att göra replikat med 3-5 NGM-plattor för varje behandling; Dessa replikat kan användas för statistisk analys. - Överför till den nya NGM-plattan enligt beskrivningen ovan och räkna antalet ägg varje dag. Räkna maskarna som kröp av, dog och kläcktes internt.
- Upprepa dessa steg tills maskarna inte lägger några fler ägg, vanligtvis om 5 dagar.
- Beräkna antalet ägg som läggs per mask från varje tallrik och summera dessa värden varje dag i 5 dagar för att bestämma det totala antalet ägg som läggs.
OBS: Exkludera antalet maskar som kröp av och kläcktes internt från beräkningen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma, USA | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Etoposide | Sigma, USA | E1383 | |
| 35 × 10 mm Petri dish | SPL Life Sciences, South Korea | 10035 | |
| Stereo microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |
