FITC-Dextran Feeding: En metode til at kvantificere tarmpermeabilitet i C. elegans

Abstract

Kilde: Le, T.A.N., et al. Måling af bakteriers og kemikaliers virkninger på tarmpermeabiliteten af Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019). 

Denne video introducerer en metode til at visualisere og måle integriteten af C. elegans tarm lumen ved fodring orme FITC-mærket dextran.  Eksempelprotokollen viser analysen udført med 3,3′-diindolylmethan (DIM)-behandlede og patogenfodrede orme.

Protocol

Denne protokol er et uddrag fra Le et al, Måling af virkningerne af bakterier og kemikalier på tarm permeabilitet caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). Forberedelse af NGM Plader til test af virkningerne af et kemikalie (DIM) på tarmgennemtrængelighede…

Representative Results

Figur 1: Dim’s indvirkning på tarmpermeabiliteten af C. elegans fodret P. aeruginosa. Mikroskopibilleder af orme fra (A) E. coli OP50 uden FITC-dextranfodring, (B) E. coli med FITC-dextranfodring, (C) P. aeruginosa PAO1 med FITC-dextranfod…

Materials

3,3’-diindolylmethane	Sigma	D9568
90×15 mm Petri dishes	SPL Life Sciences, South Korea	10090
Bactor Agar	Beckton Dickinson	REF. 214010
Formaldehyde solution	Sigma	F1635
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Cholesterol	Sigma	C3045
Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene	Corning Incorporated	REF. 3631
Dimethyl sulfoxide	Sigma	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Fluorescein isothiocyanate – dextran	Sigma	FD10S
Harmony software	PerkinElmer		verson 3.5
Magnesium sulfate heptahydrate	Fisher Bioreagents	BP2213-1
Fluoromount aqueous mounting medium	Sigma	F4680
Operetta CLS High-Content Analysis System	PerkinElmer	HH16000000
Peptone	Merck	EMD 1.07213.1000
Pseudomonas aeruginosa PA01	Korean Collection for Type Culture	KCTC NO. 1637
Sodium Chloride	Fisher Bioreagents	BP358-1
Stereo Microscope	Nikon, Japan	SMZ800N